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你對支原體檢測了解有多少呢,?
閱讀:894發(fā)布時間:2020-8-27
支原體是細胞外生存的小微生物,是一類缺乏細胞壁的原核細胞型微生物,,呈高度多形性,,有球形、桿形,、絲狀,、分枝狀等多種形態(tài)。它不同于細菌,,也不同于病毒,。從人體分離的16種支原體中,5種對人有致病性,,即肺炎支原體,、解脲支原體、人型支原體,,生殖支原體及發(fā)酵支原體等,。支原體只能黏附在呼吸道或泌尿生殖道的上皮細胞表面的受體上,而不進入組織和血液,。目前診斷支原體感染用的是培養(yǎng)法,、血清學(xué)檢測法和基因診斷。
分離培養(yǎng)法
分離培養(yǎng)法是支原體檢測的金標方法,,其檢測準確度高,。這種方法是從可疑的細胞培養(yǎng)體系中取樣,并接種到適宜支原體生長的瓊脂平板上,。如果樣本中含有支原體,,它們就會在這種瓊脂平板上*生長,終形成明顯可見的特征性菌落,。分離培養(yǎng)法基本不會出現(xiàn)假陰性結(jié)果,,因此被譽為支原體檢測金標準。不過分離培養(yǎng)法也存在兩個弊端,,一是檢測時間太長,,支原體要長出明顯克隆至少需要4周時間。二是盡管可以檢測絕大多數(shù)支原體種類,,分離培養(yǎng)法也有力所不及的時候,。
DNA檢測
DNA 檢測需要將可疑樣品與指示細胞共同培養(yǎng),因此一般需要幾天時間。DNA檢測所用的指示細胞通常是細胞質(zhì)區(qū)域較大的Vero細胞,,如果原樣本中含有支原體,,那么當(dāng)細胞DNA被熒光染料(如Hoechst染料)染色時,就可以在指示細胞的核周圍觀察到熒光斑點或熒光顆粒,。分離培養(yǎng)法用來檢測支原體菌株并不可靠,,而DNA法可以準確的將其檢測出來。
PCR法
PCR 法也可以檢測菌株,,PCR法檢測支原體只需幾個小時,,是不靈敏的支原體檢測方法。該方法采用針對支原體DNA的引物用PCR檢測可疑樣本,,其中PCR引物通常針對支原體的16S rRNA基因,。在凝膠電泳過程中,支原體DNA會顯示為特異性條帶,,以此指示支原體的存在,。PCR法可以檢測大多數(shù)支原體,但謹慎起見可同時使用另一種檢測方法來進行驗證,。
酶學(xué)檢測和ELISA
此外,,也還存在一些其他支原體檢測方法。例如酶學(xué)檢測是將可疑樣本添加到特定底物中,,在這一體系內(nèi)支原體的酶可以將ADP轉(zhuǎn)化為ATP,,隨后能利用ATP發(fā)光的luciferase酶就可以指示支原體的存在。ELISA也能用于支原體檢測,,以ELISA法為基礎(chǔ)的支原體檢測一般使用針對支原體16S rRNA基因的帶標記探針或抗體,,來檢測培養(yǎng)物中是否含有支原體。
定期檢測
支原體感染會使培養(yǎng)細胞慢慢枯萎,,因此對培養(yǎng)細胞定期進行支原體檢測非常重要,。一般來說每1至3個月就應(yīng)該進行一次支原體檢測。將定期支原體檢測常規(guī)化堅持下去,,是細胞培養(yǎng)實驗室應(yīng)對支原體感染的關(guān)鍵,。
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