mRNA：即messenger RNA 信使RNA是由DNA經(jīng)由轉(zhuǎn)錄而來(lái),，帶著相應(yīng)的遺傳訊息，為下一步轉(zhuǎn)譯成蛋白質(zhì)提供所需的訊息,。在細(xì)胞中,，mRNA從合成到被降解，經(jīng)過(guò)了數(shù)個(gè)步驟,。在轉(zhuǎn)錄的過(guò)程中,，第二型RNA聚合酶從DNA中復(fù)制出一段遺傳訊息到mRNA前體pre-mRNA上。在原核生物中,，除了5'加帽之外mRNA并未被進(jìn)一步處理而經(jīng)常是邊轉(zhuǎn)錄邊轉(zhuǎn)譯,。在真核生物中，轉(zhuǎn)錄跟轉(zhuǎn)譯發(fā)生在細(xì)胞的不同位置,，轉(zhuǎn)錄發(fā)生在儲(chǔ)存DNA的細(xì)胞核中,，而轉(zhuǎn)譯是發(fā)生在細(xì)胞質(zhì)中。

一,、文庫(kù)類(lèi)型

根據(jù)研究對(duì)象不同選擇相應(yīng)的建庫(kù)方法

在測(cè)mRNA過(guò)程中,，首先要去除rRNA。以人為例,，在抽提的總RNA中，95%的RNA是rRNA,，2%的RNA是mRNA,，剩下的則是lncRNA、microRNA,、siRNA等,。rRNA整個(gè)人類(lèi)當(dāng)中是非常保守的，在各個(gè)組織器官中也是非常穩(wěn)定的,，因此這些測(cè)序結(jié)果對(duì)我們的研究是沒(méi)有用處的,。mRNA則是RNA中比較重要的部分。

二,、建庫(kù)流程

Illumina,、Kapa公司的Truseq RNA建庫(kù)方法是應(yīng)用廣泛的一種，真核普通轉(zhuǎn)錄組為例：

首先以mRNA的Poly(A)(高等生物*的)這個(gè)特點(diǎn),，讓帶有Poly(T)探針的磁珠與總RNA進(jìn)行雜交,，使mRNA和磁珠相結(jié)合在一起。接著回收磁珠,，將帶有Poly(A)的mRNA從磁珠上洗脫下來(lái),。

然后用鎂離子溶液將洗脫下來(lái)的mRNA打成片段，被打斷的mRNA片段用隨機(jī)引物逆轉(zhuǎn)錄出鏈的cDNA,，再合成出第二鏈,，這樣就有了雙鏈cDNA。對(duì)雙鏈cDNA末端修復(fù)，加A加接頭,。片段選擇,，PCR擴(kuò)增、純化（如果樣本中存在污染物,，則需要結(jié)合試劑盒進(jìn)一步純化）,。

注：

這個(gè)建庫(kù)方法對(duì)mRNA的完整性有較高要求，因此如果mRNA發(fā)生降解,，那么磁珠只能吸附靠近3’端的mRNA斷片,，會(huì)在富集階段被洗脫，導(dǎo)致后數(shù)據(jù)有一定的偏差（在RNA測(cè)序質(zhì)控時(shí)就能發(fā)現(xiàn)mRNA的3’端以及5’端是否有偏移）,。

一般在會(huì)測(cè)序前對(duì)總RNA進(jìn)行一次質(zhì)檢,，根據(jù)電泳質(zhì)檢結(jié)果中的18S和28S（rRNA）兩個(gè)峰的高度以及峰的尖度來(lái)判斷RNA的質(zhì)量，峰越高越尖（RIN > 8.0）表示RNA的完整度越好,。除了mRNA普通文庫(kù)構(gòu)建外,，還有真核鏈特異性文庫(kù)、lncRNA文庫(kù),、SmallRNA文庫(kù)等,。針對(duì)一些FF(Formalin-Fixed)樣本和FFPE(Paraffin-Embedded)石蠟包埋樣本以及原核生物的總RNA中去除rRNA，不適合用上述mRNA建庫(kù)方法,。需要結(jié)合RiboZero,、RiboMinus等來(lái)去除，其實(shí)是針對(duì)rRNA序列進(jìn)行雜交捕獲去除的原理來(lái)去除的,。

Oligo(dT)₃₀磁性微球是基于堿基互補(bǔ)配對(duì)原則以及mRNA含有poly(A)尾巴的特點(diǎn)設(shè)計(jì)而成,，適用于從真核總RNA，或直接從細(xì)胞,、部分病毒,、動(dòng)物和植物組織的粗提物中快速分離完整的高純度mRNA。

磁性微球產(chǎn)品訂購(gòu)信息

產(chǎn)品名稱(chēng) 貨號(hào) 儲(chǔ)存溫度保質(zhì)期

Oligo(dT)₃₀ 磁性微球 MS04T 2-8℃ 2年

TruSeq standed mRNA Library Prep mRNA文庫(kù)構(gòu)建試劑盒

KAPA mRNA文庫(kù)構(gòu)建試劑盒適用于illumina測(cè)序平臺(tái),，該試劑盒適用于去除了tRNA或富含poly(A)的10-400ng RNA為模板構(gòu)建RNA文庫(kù)所需的所有酶和緩沖液,。

產(chǎn)品應(yīng)用：

基因表達(dá)；
新的轉(zhuǎn)錄本和SNP鑒定,；
拼接位點(diǎn)及基因融合識(shí)別,。

?產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

減少樣品手動(dòng)操作及總的時(shí)間
從100ng ~ 4ug 的靈活DNA樣本量
KAPA HiFi酶在文庫(kù)擴(kuò)增中有強(qiáng)有力的表現(xiàn)
試劑及反應(yīng)體系便于自動(dòng)化操作

?Kapa試劑盒產(chǎn)品訂購(gòu)信息

品牌貨號(hào) 名稱(chēng) 規(guī)格

KAPA KK8420 KAPA Stranded mRNA-Seq Library Preparation Kit -illumina平臺(tái) 24sample

KAPA KK8421 KAPA Stranded mRNA-Seq Library Preparation Kit -illumina平臺(tái) 96sample

TruSeq鏈?zhǔn)絤RNA文庫(kù)制備試劑盒以精簡(jiǎn)、經(jīng)濟(jì)及可擴(kuò)展的方式對(duì)mRNA-Seq進(jìn)行文庫(kù)制備,，可測(cè)量鏈取向,。準(zhǔn)確測(cè)量基因和轉(zhuǎn)錄本豐度，并檢測(cè)編碼轉(zhuǎn)錄組中的已知特征和新特征,。

產(chǎn)品英文名稱(chēng)：TruSeq® Stranded mRNA Library Prep

產(chǎn)品中文名稱(chēng)：TruSeq鏈?zhǔn)絤RNA文庫(kù)制備試劑盒

Illumina TruSeq鏈?zhǔn)絤RNA文庫(kù)制備試劑盒特點(diǎn)

TruSeq鏈?zhǔn)絤RNA文庫(kù)制備試劑盒為編碼轉(zhuǎn)錄組分析提供了一個(gè)精簡(jiǎn),、高性?xún)r(jià)比且可擴(kuò)展的解決方案,。它與多種樣本兼容。

精密準(zhǔn)確

此試劑盒可讓您測(cè)量mRNA鏈方向性以檢測(cè)反義轉(zhuǎn)錄本,，并為您增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄本注釋和提高比對(duì)效率,。其提供高度均勻的覆蓋能力，可更好地發(fā)現(xiàn)可變剪切,、基因融合和等位基因特異性表達(dá)等特征,。

性?xún)r(jià)比高

鏈信息可讓您識(shí)別RNA轉(zhuǎn)錄本來(lái)自于2條DNA鏈中的哪一條。此信息提高了轉(zhuǎn)錄本注釋的可信度,，尤其針對(duì)非人類(lèi)樣本,。識(shí)別鏈起源可增加比對(duì)片段百分比，從而降低每個(gè)樣本的測(cè)序成本,。

可擴(kuò)展

該試劑盒能可靠檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)和低質(zhì)量樣本,，且其工作流程可與眾多不同的研究設(shè)計(jì)兼容

Illumina TruSeq® Stranded mRNA Library Prep產(chǎn)品訂購(gòu)信息

品牌貨號(hào) 名稱(chēng) 規(guī)格

Illumina 20020594 TruSeq® Stranded mRNA Library Prep 48 Samples

Illumina 20020595 TruSeq® Stranded mRNA Library Prep 96 Samples

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紅榮微再（上海）生物工程技術(shù)有限公司主營(yíng)：干細(xì)胞,、醫(yī)療、細(xì)胞治療,、器官再生四大板塊的產(chǎn)品,，以"傳遞科學(xué)價(jià)值，服務(wù)科學(xué)研究”為宗旨

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