分享:針對(duì)液相色譜柱常見(jiàn)幾種問(wèn)題的解決方案
1.柱壓?jiǎn)栴}柱壓?jiǎn)栴}是使用高效液相色譜過(guò)程中需要密切注意的地方，柱壓的穩(wěn)定與色譜圖峰形的好壞,、柱效,、分離效果及保留時(shí)間等密切相關(guān)。
1.1壓力過(guò)高：
這是高效液相在使用中最常見(jiàn)的問(wèn)題,，指的是壓力突然升高,，一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時(shí),，我們應(yīng)該分段進(jìn)行檢查,。
（1）首先斷開(kāi)真空泵的入口處,，此時(shí),，PEEK管里充滿液體，使PEEK管低于溶劑瓶,，看液體是否自由滴下,，如果，液體不滴或緩慢滴下,，則是溶劑過(guò)濾頭堵塞,。
處理方法：
用30%的硝酸浸泡半個(gè)小時(shí)，在用超純水沖洗干凈,。如果液體自由滴下,，溶劑過(guò)濾頭正常，再檢查,；
?。?）打開(kāi)Purge閥，使流動(dòng)相不經(jīng)過(guò)柱子,，如果壓力沒(méi)有明顯下降,，則是過(guò)濾白頭堵塞。
處理方法：
將過(guò)濾白頭取出,，用10%的異丙醇超聲半個(gè)小時(shí),。如果壓力降至100PSI（6.7Bar）以下，過(guò)濾白頭正常,，再檢查；
?。?）把色譜柱出口端取下,，如果壓力不下降，則是柱子堵塞。
處理方法：
如果是緩沖鹽堵塞,，則用95%的水沖至壓力正常,。如果是一些強(qiáng)保留的物質(zhì)導(dǎo)致堵塞，則要用比現(xiàn)在流動(dòng)相更強(qiáng)的流動(dòng)相沖至壓力正常,。
假如,，按上面的方法長(zhǎng)時(shí)間沖洗壓力都不下降，則可考慮將柱子的進(jìn)出口反過(guò)來(lái)接在儀器上,，用流動(dòng)相沖洗柱子,。這時(shí)，如果柱壓仍不下降,，只有換柱子入口篩板,，但是，一旦操作不甚,，很容易造成柱效下降,，所以，盡量少用,。
1.2壓力過(guò)低
壓力過(guò)低的現(xiàn)象一般是由于系統(tǒng)泄漏
處理方法：
尋找各個(gè)接口處,，特別是色譜柱兩端的接口，把泄漏的地方旋緊即可,。當(dāng)然,，還有一個(gè)原因就是泵里進(jìn)了空氣，但此時(shí)表現(xiàn)的往往是壓力不穩(wěn),，忽高忽低,，更嚴(yán)重一點(diǎn)會(huì)導(dǎo)致泵無(wú)法吸上液體。
處理方法：
打開(kāi)Purge閥,，用3～5mL/min的流速?zèng)_洗,，如果不行，則要用專用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出,。
2.漂移問(wèn)題主要包括基線漂移和保留時(shí)間漂移,。
2.1基線漂移
一般說(shuō)來(lái)，機(jī)器剛起動(dòng)時(shí),，基線容易漂移,，大概要半個(gè)小時(shí)的平衡時(shí)間，如果,，你用了緩沖溶液或緩沖鹽,，還有就是在低波長(zhǎng)下（220nm）平衡時(shí)間相對(duì)會(huì)比較長(zhǎng)，但是,，如果你在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)基線漂移,，則你要考慮下面的原因：
?、僮贤鉄裟芰坎蛔恪?/div>
解決方法：
更換新的紫外燈,；
?、谥鶞夭▌?dòng)。
解決方法：
控制好柱子和流動(dòng)相的溫度,，檢查是否有打開(kāi)的窗戶或空調(diào)對(duì)著柱溫箱,。
③流通池被污染或有氣體,。
解決方法：
用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池（最好斷開(kāi)柱子）,。如有需要，可以用1N的硝酸（不要用鹽酸）,。
?、芰鲃?dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成,。
解決方法：
檢查流動(dòng)相的組成,，使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級(jí)的溶劑。
?、輼悠分杏袕?qiáng)保留的物質(zhì)（高K'值）以饅頭峰樣被洗脫出,，從而，表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線,。
解決方法：
使用保護(hù)柱,，如有必要，在進(jìn)樣之間,。在分析過(guò)程中,，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。
?、迿z測(cè)器沒(méi)有設(shè)定在最大吸收波長(zhǎng)處,。
解決方法：
將波長(zhǎng)調(diào)整至最大吸收波長(zhǎng)處；
?、吡鲃?dòng)相的pH值沒(méi)有調(diào)節(jié)好,。
解決方法：
加適量的酸或堿調(diào)至最佳pH值；
2.2保留時(shí)間漂移
保留時(shí)間重現(xiàn)是液相性能好壞的一個(gè)重要標(biāo)志,，同一種東西,，兩次的保留時(shí)間相差不要超過(guò)15s，超過(guò)了半分鐘可看做保留時(shí)間漂移,，就無(wú)法進(jìn)行定性,，你要考慮以下原因：
①溫控不當(dāng),。
解決方法：
調(diào)好柱溫,，檢查是否有打開(kāi)的窗戶或空調(diào)對(duì)著柱溫箱,。
?、诹鲃?dòng)相比例變化,。
解決方法：
檢查四元泵的比例閥是否有故障。
?、凵V柱沒(méi)有平衡,。
解決方法：
在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱。
?、芰魉僮兓?。
解決方法：
重新設(shè)定流速。
?、荼弥杏袣馀?。
解決方法：
從泵中除去氣泡。
2.3峰型異常問(wèn)題
峰型問(wèn)題是液相的主要問(wèn)題,，在做液相過(guò)程中,，我們就是要變換不同的條件來(lái)改善不好的峰型，對(duì)于各種各樣的異常峰,，要區(qū)別對(duì)待,，從主要問(wèn)題出發(fā)，一個(gè)一個(gè)加以解決,。
?、偎蟹寰鶠閷挿濉?/div>
解決方法：
系統(tǒng)未達(dá)到平衡,；
溶解樣品的溶劑極性比流動(dòng)相差很多,；
色譜柱尺寸及類型選擇不正確；
色譜柱或保護(hù)柱被污染或柱效降低,；
溫度變化造成的影響,。
②所出峰比預(yù)想的小,。
解決方法：
樣品黏度過(guò)大,；進(jìn)樣品故障或進(jìn)樣體積誤差；檢測(cè)器設(shè)置不正確,，定量環(huán)體積不正確,；檢測(cè)池污染；檢測(cè)器燈出現(xiàn)問(wèn)題,。
?、凵V圖中未出峰。
解決方法：
系統(tǒng)未進(jìn)樣或樣品分解,；
泵未輸液或流動(dòng)相使用不正確,；
檢測(cè)器設(shè)置不正確,；
針對(duì)以上情況成因作相應(yīng)調(diào)整即可。,。,。
④一個(gè)峰或幾個(gè)峰是負(fù)峰,。
解決方法：
流動(dòng)相吸收本底高,；進(jìn)樣過(guò)程中進(jìn)入空氣；樣品組分的吸收低于流動(dòng)相,。
?、菟蟹寰鶠樨?fù)峰。
解決方法：
信號(hào)電纜接反或檢測(cè)器輸出極性設(shè)置顛倒,；
光學(xué)裝置尚未達(dá)到平衡,。
⑥出現(xiàn)雙峰或肩峰,。
解決方法：
進(jìn)樣量過(guò)大,；樣品濃度過(guò)高；
保護(hù)柱或色譜柱柱頭堵塞,；
保護(hù)拄或色譜柱污染或失效,；
柱塌陷或形成短通道。
?、咔吧旆?。
解決方法：
進(jìn)樣量或樣品濃度高；
溶解樣品的溶劑較流動(dòng),。
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