吸光度原理
l 吸光度：當(dāng)入射光頻率與物質(zhì)分子的震動頻率一致,，或者入射光引起物質(zhì)分子電子能級躍遷，都會產(chǎn)生光學(xué)吸收現(xiàn)象,。溶液的濃度越高,，穿過溶液的分子也會相應(yīng)地被吸收越多。
l 其他：入射光透過物質(zhì)沒有發(fā)生任何反應(yīng)或者變化,，直接透過的光即為透射光,。彈性散射的發(fā)生會引起光改變方向，但是不會引起波長或者能量的變化,，反之則為非彈性散射,。
吸光度與透過率關(guān)系
l 測試樣品的透過率
l 透過率為透過光強(qiáng)度與原始光強(qiáng)的比值
如何根據(jù)您的應(yīng)用選擇不同的采樣附件是至關(guān)重要的。這其中就包括您需要考慮您的樣品是液體的還是氣體的,；樣品的光學(xué)密度如何,；是要原位測試，還是過程控制,，或者是在一個(gè)反應(yīng)腔室內(nèi),。從應(yīng)用出發(fā)進(jìn)行附件篩選，海洋光學(xué)為您提供眾多附件選擇,，從簡單的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用（比如比色皿和比色皿支架）到復(fù)雜的采樣工具（比如透射探頭和流動注射裝置等等）,。
如何確定未知樣品的濃度
l Lambert-Beer定律是一個(gè)線性方程
l 使用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液測試其吸光度值
l 吸光度值和濃度之間可以建立一條線性關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線
l 最后通過測量未知樣品的吸光度值，從線性關(guān)系曲線中讀取該樣品的濃度值
吸光度測量
基于吸光度的簡單實(shí)現(xiàn)與易使用,，吸光度被廣泛運(yùn)用于液體和氣體的光譜測量技術(shù)中,。吸光度光譜可以對物質(zhì)進(jìn)行定量鑒別或者對物質(zhì)進(jìn)行指紋認(rèn)證，亦或可以對溶液中的分子進(jìn)行濃度定量分析,。
吸光度測量可以以多種形式呈現(xiàn),。或針對液體或?qū)怏w,，而且還可以將該應(yīng)用集成到工業(yè)應(yīng)用環(huán)境和客戶所關(guān)注的測試中,。樣品不再僅僅使用比色皿作為載體，流動池,、浸入式探頭,、微量進(jìn)樣器、氣體存儲皿,、微量比色皿等等都可以作為采樣裝置,。
使用模塊化光譜儀,，我們可以針對特定的吸光度測量來選擇不同波長范圍和分辨率的光譜儀，而且還能在實(shí)驗(yàn)室或者現(xiàn)場對整套光學(xué)測量裝置進(jìn)行快速,、方便地更改,。事實(shí)上，基于海洋光學(xué)強(qiáng)大的光譜儀,、光源和采樣附件的產(chǎn)品線和靈活易用的搭配,，可以針對不同的吸光度試驗(yàn)搭配出N中選擇。
吸光度測量的附件選擇
如何為您的吸光度測量選擇合適的采樣附件,？以下提供一些參考：
測量使用環(huán)境與地點(diǎn),？更精確地說，什么樣的附件能滿足您的現(xiàn)場和實(shí)驗(yàn)室,，并且方便易用,？如果測試樣品能很簡單地使用比色皿或者試管進(jìn)行測量，那選擇就可以擴(kuò)展到比色皿支架（圖1）或者其他支架類產(chǎn)品,。如果需要進(jìn)行實(shí)時(shí)的原位測量,，或者流動液體的測量，可以選擇透射形浸入式探頭（不同光程可選）（圖2）或者流動池（圖3）等等,。
l 樣品的性狀：液體還是氣體,？由于氣體的特性，我們要么選擇高濃度樣品,，要么選擇長光程容器進(jìn)行測量,。根據(jù)不同的樣品，10cm光程的容器一般都足夠了,，比如CUV-UV-10（圖4）,，或者使用準(zhǔn)直透鏡直接接觸到樣品中進(jìn)行測試。
l 測試樣品的光學(xué)密度如何,？光學(xué)密度OD值直接影響您對測試樣品不同光程容器的選擇,。光學(xué)密度越高，所需要的光程就越短,。比如,，SpecVette™作為高濃度樣品的理想配件，它的光程可以短至250µm,，另外還有1cm和10cm的標(biāo)準(zhǔn)配件可選,。另外一方面，低OD的樣品需要長光程配件,，比如可以擴(kuò)展到500cm的長光程流通池（圖3）就是比較好的選擇,。如果您需要了解更多樣品濃度與光程之間的關(guān)系信息，請參考比爾-朗博定律的具體介紹。
l 樣品的體積如何,？測量樣品的體積也影響采樣附件的選擇,。針對低于2uL的微量樣品，可以選擇微量比色皿（圖5）和微量取樣器（圖6）
針對連續(xù)流動的樣品怎么選擇,？形流動注射裝置（圖7）,，毛細(xì)管電泳池（圖8），還包括那些可以使用泵裝置/塑料套管連接的裝置（圖9）都是流動樣品測量吸光度的選擇,。
吸光度測量采樣附件選擇一覽表
類型 | 可選 | 最佳應(yīng)用環(huán)境 |
比色皿 | 石英和塑料 | 實(shí)驗(yàn)室 |
比色皿支架
| 標(biāo)準(zhǔn)或者多用途,； 恒溫控制； 可與光譜儀集成 | 實(shí)驗(yàn)室,； 精確溫控實(shí)驗(yàn)； |
小體積,，短光程采樣 | 5 µl 比色皿,； 250 µm短光程附件 | 核酸和蛋白質(zhì)或者其他小體積樣品分析； 光學(xué)密度較高的樣品（比如墨水和染料）測試 |
流通池
| Z形流通池取樣分析,； 小體積樣品池,； | 微量液體的測試； 低濃度測試,； 過程控制 |
浸入式探頭
| 苛刻的實(shí)驗(yàn)環(huán)境,； 高溫、高壓環(huán)境 | 實(shí)驗(yàn)室使用,； 苛刻的化學(xué)或者物理環(huán)境 |
吸光度標(biāo)準(zhǔn)品 | NIST可追溯標(biāo)準(zhǔn)品,； UV (200-450 nm) ； 可見 (400-900 nm) | 質(zhì)量控制,； 對吸光度要求很高的應(yīng)用環(huán)境 |
Maya2000 Pro | 適用于紫外吸光度測量的高分辨率光譜儀,。使用#H7號光柵，波長檢測范圍200-300nm,，5µm狹縫,，CCD增加聚光棱鏡以增加靈敏度 |
D-2000 | 氘燈 (~215-400nm) |
CUV-UV-10 | 10cm光程比色皿和支架 |
CV-Q-100 | 圓柱形石英比色皿（帶Teflon封口蓋），體積28.2mL |
QP455-025-XSR-BX | 抗紫外老化光纖,，芯徑455µm,，長度0.25m |
OceanView | 光譜儀操作軟件 |
Flame-S-UV-VIS | 模塊化光譜儀，光譜范圍覆蓋200-850nm,，狹縫25µm,，消二級衍射濾光片 |
DH-2000-BAL | 平衡氘燈和鹵素?zé)艄鈴?qiáng)的光源，波長范圍215-2000nm |
CUV-UV | 1cm光程比色皿支架 |
CV-Q-10 | 10cm光程石英比色皿 |
QP450-2-XSR | 抗紫外老化光纖,，芯徑450µm,，長度2m |
吸光度標(biāo)準(zhǔn)品 | NIST可追溯標(biāo)準(zhǔn)品； |
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
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