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紫外可見分光光度計(jì)工作原理
分子的紫外可見吸收光譜是由于分子中的某些基團(tuán)吸收了紫外可見輻射光后,發(fā)生了電子能級(jí)躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜,。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu),,其吸收光能量的情況也就不會(huì)相同,,因此,每種物質(zhì)就有其*的,、固定的吸收光譜曲線,,可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長(zhǎng)處的吸光度的高低判別或測(cè)定該物質(zhì)的含量,這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ),。
分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分,、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。它是帶狀光譜,,反映了分子中某些基團(tuán)的信息,。可以用標(biāo)準(zhǔn)光圖譜再結(jié)合其它手段進(jìn)行定性分析,。
根據(jù)Lambert-Beer定律說明光的吸收與吸收層厚度成正比,,比耳定律說明光的吸收與溶液濃度成正比;如果同時(shí)考慮吸收層厚度和溶液濃度對(duì)光吸收率的影響,即得朗伯-比耳定律,。即A=εbc,,(A為吸光度,ε為摩爾吸光系數(shù),,b為液池厚度,,c為溶液濃度)就可以對(duì)溶液進(jìn)行定量分析,。
將分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品以相同濃度配制在同一溶劑中,在同一條件下分別測(cè)定紫外可見吸收光譜,。若兩者是同一物質(zhì),,則兩者的光譜圖應(yīng)*一致。如果沒有標(biāo)樣,,也可以和現(xiàn)成的標(biāo)準(zhǔn)譜圖對(duì)照進(jìn)行比較,。這種方法要求儀器準(zhǔn)確,精密度高,,且測(cè)定條件要相同,。
實(shí)驗(yàn)證明,不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強(qiáng)度也不同,,這可以利用紫外光譜來判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強(qiáng)度,,以確定選擇哪一種溶劑。
日常維護(hù)
一,、溫度和濕度是影響儀器性能的重要因素,。他們可以引起機(jī)械部件的銹蝕,使金屬鏡面的光潔度下降,,引起儀器機(jī)械部分的誤差或性能下降;造成光學(xué)部件如光柵,、反射鏡、聚焦鏡等的鋁膜銹蝕,,產(chǎn)生光能不足,、雜散光、噪聲等,,甚至儀器停止工作,,從而影響儀器壽命。維護(hù)保養(yǎng)時(shí)應(yīng)定期加以校正,。應(yīng)具備四季恒濕的儀器室,,配置恒溫設(shè)備,特別是地處南方地區(qū)的實(shí)驗(yàn)室,。
二,、環(huán)境中的塵埃和腐蝕性氣體也會(huì)影響機(jī)械系統(tǒng)的靈活性、降低各種限位開關(guān),、按鍵,、光電偶合器的可靠性,也是造成必須學(xué)部件鋁膜銹蝕的原因之一,。因此必須定期清潔,,保障環(huán)境和儀器室內(nèi)衛(wèi)生條件,防塵等,。
三,、儀器使用一定周期后,內(nèi)部會(huì)積累一定量的塵埃,,由維修工程師或在工程師指導(dǎo)下定期開啟儀器外罩對(duì)內(nèi)部進(jìn)行除塵工作,,同時(shí)將各發(fā)熱元件的散熱器重新緊固,對(duì)光學(xué)盒的密封窗口進(jìn)行清潔,,必要時(shí)對(duì)光路進(jìn)行校準(zhǔn),,對(duì)機(jī)械部分進(jìn)行清潔和必要的潤(rùn)滑,后,,恢復(fù)原狀,,再進(jìn)行一些必要的檢測(cè)、調(diào)校與記錄,。
注意事項(xiàng)
1.開機(jī)前將樣品室內(nèi)的干燥劑取出,,儀器自檢過程中禁止打開樣品室蓋。
2.比色皿內(nèi)溶液以皿高的2/3~4/5為宜,,不可過滿以防液體溢出腐蝕儀器,。測(cè)定時(shí)應(yīng)保持比色皿清潔,池壁上液滴應(yīng)用擦鏡紙擦干,,切勿用手捏透光面,。測(cè)定紫外波長(zhǎng)時(shí),需選用石英比色皿,。
3.測(cè)定時(shí),,禁止將試劑或液體物質(zhì)放在儀器的表面上,如有溶液溢出或其它原因?qū)悠凡叟K,,要盡可能及時(shí)清理干凈,。
4.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后將比色皿中的溶液倒盡,然后用蒸餾水或有機(jī)溶劑沖洗比色皿至干凈,,倒立晾干,。關(guān)電源將干燥劑放入樣品室內(nèi),蓋上防塵罩,,做好使用登記,,得到管理老師認(rèn)可方可離開。