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如何選擇高校液相色譜柱
現(xiàn)代液相色譜中，分離效果好壞的一個(gè)重要指標(biāo)是色譜填料的選擇,。但是色譜填料的選擇范圍很寬,，因此，要做合適的選擇,，必須對此有一定的認(rèn)識和了解,。當(dāng)然，像藥典液相柱,、中藥材分析柱,、益母草柱、利巴韋林柱,、甘露醇柱,、益母草柱、氨基酸柱,、檳榔柱,、乳糖柱、人參柱,、麻黃柱,、木犀草苷分析柱、葡甲胺柱,、人血白蛋白柱,、肝素鈉柱、國達(dá)色譜柱,、硫酸軟骨素柱,、頭孢他啶柱、苯海拉明柱,、藥典柱,、苦參堿柱、抗體柱,、頭孢聚合物體積排阻柱,、石英毛細(xì)管柱等一些柱可以另作思考。
1,、 硅膠基質(zhì)填料
正相色譜 爭相色譜用的固定相通常為硅膠以及其他具有極性官能團(tuán)的鍵合相填料,，如NH2 APS CN和CPS.由于硅膠表面的硅羥基或其他極性基團(tuán)極性較強(qiáng)。因此,，分離的次序是依據(jù)樣品中各組分的極性大小,，即極性較弱的祖墳zui先被沖洗出色譜柱,。正相色譜使用的流動(dòng)相極性相對比固定相低，如正己烷,，氯仿,，二氯甲烷等。
反相色譜
反相色譜用填料經(jīng)常是以硅膠為基質(zhì),，表面鍵合有極性相對較弱官能團(tuán)的鍵合相,。反相色譜所使用的流動(dòng)相極性較強(qiáng)，通常為水,、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物,。樣品流出的順序是極性較強(qiáng)的組分zui先被沖洗出,，而極性弱的組分會再色譜上有更強(qiáng)的保留。通常的反相填料有C18,，C8,，C4等。
2,、 聚合物填料
聚合物填料多為聚苯乙烯,，二乙烯基苯共聚物或聚甲基丙烯酸酯等，其主要優(yōu)點(diǎn)是在pH值在1-14條件下均可使用,，相對于硅膠基質(zhì)的C18填料,，這類填料具有更強(qiáng)的疏水性；大孔的聚合物對蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效?，F(xiàn)有聚合物填料的缺點(diǎn)是相比硅膠基質(zhì)填料色譜柱效較低,。
3、 其他無機(jī)填料
其他HPLC的無機(jī)填料色譜柱也已經(jīng)商品化,，由于其特殊的性質(zhì),，一般于特殊的用途。如,，石墨化碳黑正逐漸成為反向色譜柱填料,。這種填料的分離不同與硅膠基質(zhì)烷基鍵合相，石墨化碳黑的表面即是保留的寄出,，不再需其他的表面改性,。該柱填料一般比烷基鍵合相硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強(qiáng)。石墨化碳黑可以用于分離某些幾何異構(gòu)體,，由于HPLC流動(dòng)相中不會被溶解,，這類柱可在任何pH與溫度下使用。氧化鋁也可以用于HPLC,。氧化鋁微粒剛性強(qiáng),，應(yīng)用范圍受到一定限制,，所以未能廣泛應(yīng)用。新型色譜氧化鋯質(zhì)填料也可以用于HPLC,，商品化的只有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱,，應(yīng)用pH1-14,溫度可達(dá)100℃，由于氧化鋯填料是zui近幾年才開始研究,，加之而臨的實(shí)驗(yàn)難度,，其重要用途與優(yōu)勢尚在開發(fā)中。
4,、 怎樣選擇填料粒度
目前,，商品化的色譜填料粒度從1um到超過30um均有銷售，而分析分離主要用3-5um填料,，填料的粒度主要影響填充柱的兩個(gè)參數(shù),，即柱效和背壓，粒度越小,，柱壓越大,，柱壓的增加限制了粒度小于3um的填料應(yīng)用。在相同選擇性條件下,，提高柱效可提高分離度,，但不是*的因素，如果固定相選擇正確,，只是分離度不夠,，那么選用更小的粒度的填料是很有用的，3un填料填充柱的柱效比相同條件下的5um填料的柱效提高近30%,，然而,，3um的色譜柱的背壓卻是5um的2倍，與此同時(shí),，柱效提高意味著在相同條件下可以選用更短的色譜柱,，即相同的塔板數(shù)或分離能力，但是柱長縮短,，分析時(shí)間縮短,。另外，可以采用低粘度的溶劑做流動(dòng)相或增加色譜柱的使用溫度,，比如用乙腈代替甲醇以降低色譜柱的壓力,。