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如何選擇合適的單、多克隆抗體及抗原
閱讀：2099 發(fā)布時(shí)間：2018-7-14多克隆抗體（polyclonal antibody, pAb）：用種包含多種抗原決定簇的抗原免疫動(dòng)物,，可刺激機(jī)體多個(gè)B細(xì)胞克隆，產(chǎn)生針對(duì)多種抗原表位的不同抗體,。所獲得的免疫血清實(shí)際上是含有多種抗體的混合物,，即多克隆抗體。單克隆抗體是由單B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均,、僅針對(duì)某特定抗原表位的抗體,，稱為單克隆抗體。通常采用雜交瘤技術(shù)來制備,，雜交瘤（hybridoma）抗體技術(shù)是在細(xì)胞融合技術(shù)的基礎(chǔ)上,，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細(xì)胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合為B細(xì)胞雜交瘤。
,、單多抗優(yōu)缺點(diǎn)
| 類型 | 優(yōu)點(diǎn) | 缺點(diǎn) |
| 多克隆抗體 | 1.多克隆抗體有助于放大低表達(dá)水平的靶蛋白信號(hào),； 2.能識(shí)別多個(gè)表位； 3.比單克隆抗體能容許抗原中的微小變化,； 4.識(shí)別出與免疫原蛋白質(zhì)具有高同源性的蛋白質(zhì),，或者從非免疫原物種的組織樣品中篩選靶蛋白； 5.多克隆抗體通常是檢測(cè)變性蛋白質(zhì)的,； 6.多表位通?？商峁橛辛Φ臋z測(cè)。 | 1.易于產(chǎn)生批次間差異,； 2.產(chǎn)生非特異性抗體,，有時(shí)可能在某些應(yīng)用中產(chǎn)生背景信號(hào),； 3.不適用于探測(cè)抗原的特定結(jié)構(gòu)域，因?yàn)榭寡逋ǔ,？勺R(shí)別多個(gè)結(jié)構(gòu)域,。 |
| 單克隆抗體 | 1.雜交瘤制得后，就成為了恒定的再生源,，所有批次都將相同,； 2.切片和細(xì)胞染色造成的背景較低。 3.具有特異性,，適于分析測(cè)定中的抗或檢測(cè)組織中的抗原,，并且通常所產(chǎn)生的背景染色顯著低。 4.同質(zhì)性非常高,； 5.單克隆抗體的特異性能使其在混合物中和抗原地結(jié)合。 | 1.可產(chǎn)生特異性抗體,，但可能特異性過強(qiáng),； 2.經(jīng)過抗原的化學(xué)處理后比多克隆抗體易于丟失表位。這可通過使用同抗原的兩個(gè)或多個(gè)單克隆抗體進(jìn)行補(bǔ)償,。 |
二,、單抗和多抗的選擇
如果對(duì)抗體的特異性要求高，用量較大或需要使用致的抗體,，制備的抗體應(yīng)用要求多（WB/IP/IF/ICC等),，可以選擇制備單克隆抗體。
多克隆抗體的特異性較差,，即使是使用相同的抗原制備多抗,，不同批次間也會(huì)存在差異，因而在特異性,、致性方面有很大的局限,。所以在用多抗做免疫檢測(cè)時(shí)，容易造成背景,，例如在WB 中有雜帶,，在IHC 中背景較深等等。雖然還存在著交叉反應(yīng)的問題,，但由于多抗識(shí)別多個(gè)抗原表位,，即使是有少數(shù)幾個(gè)抗原表位被破壞或者抗原構(gòu)象改變，實(shí)驗(yàn)的結(jié)果也不會(huì)受到影響,。另外多抗需要免疫原的量大,，如果免疫原制備困難，建議制備單抗,。
若對(duì)抗體的特異性要求不高,，需要做沉淀和凝集反應(yīng)的檢測(cè)性實(shí)驗(yàn)或者只需做ELISA檢測(cè),，可以選擇制備多克隆抗體。
多抗相比較單抗仍然有制備時(shí)間短,、制備成本低的特點(diǎn),，在些情況下也是種選擇。另外,，在相同條件下,，使用多抗可以提高檢測(cè)的靈敏度，對(duì)于豐度偏低的蛋白也容易檢出,。
三,、抗原的選擇
抗原的選擇可以是天然蛋白、重組可溶蛋白,、重組變性蛋白和多肽,，抗原質(zhì)量越高，終制備高質(zhì)量抗體的幾率也會(huì)越大,！ 目前抗體制備常采用重組蛋白或多肽作為抗原,。
常規(guī)情況下，重組蛋白作為抗原往往含有多的抗原決定簇,，既有空間表位,，也會(huì)有線形序列表位，對(duì)于機(jī)體的免疫刺激也會(huì)相對(duì)充分些,，那么終獲取應(yīng)用面較廣的抗體幾率也會(huì)大很多,，尤其是目的蛋白已證明有修飾或者復(fù)雜結(jié)構(gòu)的，般都會(huì)優(yōu)先選擇重組蛋白,。
當(dāng)然也有必須用多肽制備的,，比如對(duì)同源家族某個(gè)蛋白抗體的制備，同源性非常高的,，需要找到特異性aa合成多肽,，再或者些修飾化抗體，需要在多肽合成階段定點(diǎn)修飾某些AA來制備抗體,?？乖嚯倪x擇般遵循如下基本原則1.盡可能是在蛋白表面；2.該段序列不形成α-helix,；3.N,，C端的肽段比中間的肽段好；4.避免蛋白內(nèi)部重復(fù)或接近重復(fù)段的序列,；5.避免同源性太強(qiáng)的肽段,；6.交聯(lián)可以交聯(lián)在N，C兩端,，選擇依據(jù)就是交聯(lián)在對(duì)產(chǎn)生抗體不太重要的端,；7.序列中不能有太多的Pro,，但有兩個(gè)Pro有好處，可以使肽鏈結(jié)構(gòu)相對(duì)穩(wěn)定些,，對(duì)產(chǎn)生特異性抗體有益,。