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上海嘉鵬
主營產(chǎn)品： 超微量分光光度計,核酸蛋白檢測儀,超微量紫外分光光度計,nano光度計,超微量核酸蛋白檢測儀 |
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2016-3-28 閱讀(3737)
PCR新手指南：*復(fù)性溫度的選擇標準
*復(fù)性溫度的選擇標準應(yīng)該是可擴增范圍的中間溫度,。
在使用溫度梯度的方法尋找*復(fù)性溫度時，新手往往會選擇擴增產(chǎn)物zui多的溫度條件,，然而在此后的非梯度擴增時擴增效果又不太理想。出現(xiàn)這種現(xiàn)象的主要原因是*復(fù)性溫度的選擇標準不對,。本人10多年前做過數(shù)千個基因的擴增,，通過溫度梯度實驗發(fā)現(xiàn),，能擴增出來的溫度范圍一般在3-30度。選擇的標準應(yīng)該是可擴增范圍的中間溫度,。
因為：
1,、擴增產(chǎn)物量的影響因素很多，有些是隨機的,。從定量PCR的平臺期高低的不規(guī)律可以看出來,。
2、不同儀器,、不同位置的溫度及溫度變化曲線是有差異的,。按照儀器廠家的出廠標準也準確性+-0.3度及均勻性+-0.3度
3、PCR儀進行梯度擴增時的溫度準確性會更差
選擇中間溫度可以消除儀器溫度差的影響,。
另外,，進行溫度梯度時模板量的選擇也是非常重要的。
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