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2022-12-15 閱讀(2291)
那么下面上海嘉鵬科技有限公司為大家簡(jiǎn)單介紹一下蛋白純化常見(jiàn)問(wèn)題（一）,。
Q：如何去除樣品中的 DNA/RNA 等核酸雜質(zhì)污染？
A：延長(zhǎng)超聲時(shí)間以降低粘度,。也可以使用核酸酶如 Benzonase 同時(shí)消化 DNA 和 RNA。如果來(lái)源是大腸桿菌裂解液,，含有大量的DNA,，可以用鏈霉素沉淀等方法，預(yù)先去除大量的 DNA,。
通過(guò)層析方法去除 ：由于核酸帶負(fù)電,，在陰離子柱上會(huì)結(jié)合或陽(yáng)離子柱上流穿，也可以有效去除核酸,。
去除填料上結(jié)合的核酸 ：一般采用 1M NaOH + 1M NaCl 對(duì)核酸的去除效果較好,。如果核酸的吸附過(guò)強(qiáng)，會(huì)采用強(qiáng)烈的方法,，3M NaCl可去除靠靜電吸附的核酸,，然后用 1M NaOH分解核酸，之后再用 3M NaCl 清洗,。
Q：柱子有色素如何去除,？
A：
色素性質(zhì)較復(fù)雜，可以根據(jù)填料的耐受情況,，嘗試使用高鹽,、NaOH、有機(jī)溶劑（如 30% 異丙醇或乙醇）或酸（如 0.01 M HCl）處理,，*好將填料拆出,，分別浸泡在不同試劑中。
也可以考慮使用混合試劑進(jìn)行處理,，例如：通過(guò)混合8M尿素 + 0.5 M 乙酸 + 2 M NaCl,，對(duì)于和陰離子交換等介質(zhì)緊密結(jié)合的化合物，通常很有效,；或者1 M NaOH混合1-2 M 鹽,；可以耐受有機(jī)溶劑的情況下,，嘗試1 M NaOH混合20-30%的異丙醇,；根據(jù)色素的不同性質(zhì)，也可以嘗試不同的去污劑，注意避免操作中產(chǎn)生氣泡,。
如果去除不掉,，可以定期把色素污染部分的填料去除，或驗(yàn)證是否對(duì)于樣品純化造成影響,。
Q：柱子堵了,、超壓如何處理？
A：可能原因 ：緩沖液或樣品未進(jìn)行過(guò)濾,、蛋白沉淀或雜質(zhì)殘留,、清洗不及時(shí)等引起層析柱濾膜堵塞 ；流速過(guò)快,、流動(dòng)相粘度 ( 如乙醇等 ) 過(guò)高,、溫度過(guò)低。
建議處理方法 ：首先將柱子卸下來(lái),，確定是系統(tǒng)還是柱子堵了,。如果是柱子堵了 ：參考說(shuō)明書(shū) CIP 操作進(jìn)行清潔 ；更換層析柱頂端濾膜或超聲清洗 (Hitrap,，HiPrep 與 Precision Columns 3.2/300 柱型均不能拆卸換膜 ) ,；必要時(shí)移除層析柱頂端 2-3mm 凝膠，調(diào)節(jié) Adaptor消除頂端死體積,。部分預(yù)裝柱,，也可以將填料倒出，去除板結(jié)或碎填料后,，重新裝填,。測(cè)定柱效或重復(fù)之前做過(guò)的樣品。后續(xù)注意樣品前處理（包括上柱子前的離心或過(guò)濾處理,、優(yōu)化利于樣品穩(wěn)定存在的緩沖液條件,、核酸等粘稠雜質(zhì)的去除等）以及層析柱的日常維護(hù)。
以上就是上海嘉鵬科技有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于蛋白純化常見(jiàn)問(wèn)題（一）,。
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