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主營產(chǎn)品： 超微量分光光度計,核酸蛋白檢測儀,超微量紫外分光光度計,nano光度計,超微量核酸蛋白檢測儀 |
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2021-9-1 閱讀(4072)
那么下面上海嘉鵬科技有限公司為大家簡單介紹一下關(guān)于電泳技術(shù)原理,、分類,。
電泳法,，是指帶電荷的供試品（蛋白質(zhì)、核苷酸等）在惰性支持介質(zhì)（如紙、醋酸纖維素,、瓊脂糖凝膠,、聚丙烯酰胺凝膠等）中，于電場的作用下,，向其對應(yīng)的電極方向按各自的速度進行泳動,，使組分分離成狹窄的區(qū)帶，用適宜的檢測方法記錄其電泳區(qū)帶圖譜或計算其百分含量的方法,。
電泳技術(shù)的基本原理和分類
在電場中,，推動帶電質(zhì)點運動的力（F）等于質(zhì)點所帶凈電荷量（Q）與電場強度（E）的乘積。F＝QE質(zhì)點的前移同樣要受到阻力（F）的影響,，對于一個球形質(zhì)點,，服從 Stoke定律，即：F′＝6πrην式中r為質(zhì)點半徑,，η為介質(zhì)粘度,，ν為質(zhì)點移動速度，當(dāng)質(zhì)點在電場中作穩(wěn)定運動時：
F＝F′即 QE＝6πrην
可見,，球形質(zhì)點的遷移率,，首先取決于自身狀態(tài)，即與所帶電量成正比,，與其半徑及介質(zhì)粘度成反比,。除了自身狀態(tài)的因素外，電泳體系中其它因素也影響質(zhì)點的電泳遷移率,。
電泳法可分為自由電泳（無支持體）及區(qū)帶電泳（有支持體）兩大類,。前者包括 Tise-leas式微量電泳、顯微電泳,、等電聚焦電泳,、等速電泳及密度梯度電泳。區(qū)帶電泳則包括濾紙電泳（常壓及高壓）,、薄層電泳（薄膜及薄板）,、凝膠電泳（瓊脂、瓊脂糖,、淀粉膠,、聚丙烯酰胺凝膠）等。
自由電泳法的發(fā)展并不迅速,，因為其電泳儀構(gòu)造復(fù)雜,、體積龐大，操作要求嚴(yán)格,，價格昂貴等,。而區(qū)帶電泳可用各種類型的物質(zhì)作支持體,，其應(yīng)用比較廣泛。本節(jié)僅對常用的幾種區(qū)帶電泳分別加以敘述,。
影響電泳遷移率的因素
⒈電場強度 電場強度是指單位長度（cm）的電位降,，也稱電勢梯度。如以濾紙作支持物,，其兩端浸入到電極液中,，電極液與濾紙交界面的紙長為 20cm，測得的電位降為 200V,，那么電場強度為200V/20cm＝10V/cm,。當(dāng)電壓在500V以下，電場強度在 2-10v/cm 時為常壓電泳,。電壓在 500V 以上,，電場強度在20-200V/cm 時為高壓電泳。電場強度大,，帶電質(zhì)點的遷移率加速,，因此省時，但因產(chǎn)生大量熱量,，應(yīng)配備冷卻裝置以維持恒溫,。
⒉溶液的pH值 溶液的pH決定被分離物質(zhì)的解離程度和質(zhì)點的帶電性質(zhì)及所帶凈電荷量。例如蛋白質(zhì)分子,，它是既有酸性基團（-COOH）,，又有堿性基團（-NH2）的兩性電解質(zhì)，在某一溶液中所帶正負電荷相等,，即分子的凈電荷等于零,，此時，蛋白質(zhì)在電場中不再移動,，溶液的這一pH值為該蛋白質(zhì)的等電點（isoelctric point,，pI）。若溶液pH處于等電點酸側(cè),，即pH＜pl,，則蛋白質(zhì)帶正電荷，在電場中向負極移動,。若溶液pH處于等電點堿側(cè),，即pH＞pl，則蛋白質(zhì)帶負電荷,，向正極移動,。溶液的pH離pl越遠，質(zhì)點所帶凈電荷越多,，電泳遷移率越大,。因此在電泳時,，應(yīng)根據(jù)樣品性質(zhì),，選擇合適的pH值緩沖液,。
⒊溶液的離子強度 電泳液中的離子濃度增加時會引起質(zhì)點遷移率的降低。其原因是帶電質(zhì)點吸引相反符合的離子聚集其周圍,，形成一個與運動質(zhì)點符合相反的離子氛（ionic atmosphere）,，離子氛不僅降低質(zhì)點的帶電量，同時增加質(zhì)點前移的阻力,，甚至使其不能泳動,。然而離子濃度過低，會降低緩沖液的總濃度及緩沖容量,，不易維持溶液的 pH值,，影響質(zhì)點的帶電量，改變泳動速度,。離子的這種障礙效應(yīng)與其濃度和價數(shù)相關(guān),。可用離子強度 I表示,。
⒋電滲 在電場作用下液體對于固體支持物的相對移動稱為電滲（electro-osmosis）,。其產(chǎn)生的原因是固體支持物多孔，且?guī)в锌山怆x的化學(xué)基團,，因此常吸附溶液中的正離子或負離子,，使溶液相對帶負電或正電。如以濾紙作支持物時,，紙上纖維素吸附OH 帶負電荷,，與紙接觸的水溶液因產(chǎn)生H3O+，帶正電荷移向負極,，若質(zhì)點原來在電場中移向負極,，結(jié)果質(zhì)點的表現(xiàn)速度比其固有速度要快，若質(zhì)點原來移向正極,，表現(xiàn)速度比其固有速度要慢,，可見應(yīng)盡可能選擇低電滲作用的支持物以減少電滲的影響。
以上就是上海嘉鵬科技有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于電泳技術(shù)原理,、分類,。
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