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上海嘉鵬
主營產(chǎn)品： 超微量分光光度計,核酸蛋白檢測儀,超微量紫外分光光度計,nano光度計,超微量核酸蛋白檢測儀 |
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2021-8-26 閱讀(4894)
那么下面上海嘉鵬科技有限公司為大家簡單介紹一下關(guān)于瓊脂糖凝膠電泳注意事項及操作流程：
1、 DNA的分子大小及構(gòu)型:
不同構(gòu)型DNA的移動速度次序為：共價閉環(huán)DNA（covalently closed circular,，cccDNA）>直線DNA>開環(huán)的雙鏈環(huán)狀DNA,。線狀雙鏈DNA分子在一定濃度瓊脂糖凝膠中的遷移速率與DNA分子量對數(shù)成反比,，分子越大則所受阻力越大,，也越難于在凝膠孔隙中蠕行,，因而遷移得越慢,。當(dāng)瓊脂糖濃度太高時,，環(huán)狀DNA（一般為球形）不能進入膠中,，相對遷移率為0（Rm=0），而同等大小的直線雙鏈DNA（剛性棒狀）則可以長軸方向前進（Rm>0）,，由此可見,，這三種構(gòu)型的相對遷移率主要取決于凝膠濃度。
2,、 瓊脂糖濃度：
一個給定大小的線狀DNA分子,，其遷移速度在不同濃度的瓊脂糖凝膠中各不相同。DNA電泳遷移率的對數(shù)與凝膠濃度成線性關(guān)系,。凝膠濃度的選擇取決于DNA分子的大小,。分離小于0.5kb的DNA段所需膠濃度是 1.2-1.5%，分離大于10kb的DNA分子所需膠濃度為0.3-0.7%,，DNA段大小間于兩者之間則所需膠濃度為0.8-1.0%。
3,、 DNA分子的構(gòu)象 ：
當(dāng)DNA分子處于不同構(gòu)象時,它在電場中移動距離不僅和分子量有關(guān),還和它本身構(gòu)象有關(guān),。相同分子量的線狀、開環(huán)和超螺旋DNA在瓊脂糖凝膠中移動速度是不一樣的,，超螺旋DNA移動*快,，而線狀雙鏈DNA移動*慢。如在電泳鑒定質(zhì)粒純度時發(fā)現(xiàn)凝膠上有數(shù)條DNA帶難以確定是質(zhì)粒DNA不同構(gòu)象引起還是因 為含有其他DNA引起時,，可從瓊脂糖凝膠上將DNA帶逐個回收,，用同一種限制性內(nèi)切酶分別水解，然后電泳,，如在凝膠上出現(xiàn)相同的DNA圖譜,，則為同一種 DNA。
4,、 電源電壓 ：
瓊脂糖凝膠分離大分子DNA實驗條件的研究結(jié)果表明,，在低濃度、低電壓下,，分離效果較好,。在低電壓條件下，線性DNA分子的電泳遷移率與所用的電壓呈正比,。但是,，在電場強度增加時，不同分子量的DNA段的遷移率將以不同的幅度增長,，片段越大,，因場強升高引起的遷移率升高幅度也越大,，因此電壓增加，瓊脂糖凝膠的有效分離范圍將縮小,。要使大于2kb的DNA段的分辨率達到*大電場強度不宜高于5V/cm,。
5、 嵌入染料的存在 ：
熒光染料溴化乙啶用于檢測瓊脂糖凝膠中的DNA,染料會嵌入到堆積的堿基對之間并拉長線狀和帶缺口的環(huán)狀DNA,，使其剛性更強,，還會使線狀DNA遷移率降低15％。
6,、 離子強度影響 ：
電泳緩沖液的組成及其離子強度影響DNA的電泳遷移率,。在沒有離子存在時(如誤用蒸餾水配制凝膠),電導(dǎo)率*小，幾乎不移動,，在高離子強度的緩沖液中(如誤加10×電泳緩沖液),，則電導(dǎo)很高并明顯產(chǎn)熱，嚴(yán)重時會引起凝膠熔化或DNA變性,。 對于天然的雙鏈DNA,，常用的幾種電泳緩沖液有TAE[含EDTA (pH8.0)和Tris-乙酸]，TBE(Tris-硼酸和EDTA),，TPE(Tris-磷酸和EDTA),，一般配制成濃縮母液，儲于室溫,。
以上就是上海嘉鵬科技有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于瓊脂糖凝膠電泳注意事項及操作流程,。
我們上海嘉鵬科技有限公司是專業(yè)生產(chǎn)超微量核酸蛋白測定儀、化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng),、凝膠成像分析系統(tǒng),、紫外分析儀、核酸蛋白檢測儀,、紫外檢測儀,、蛋白質(zhì)分離純化系統(tǒng)、光化學(xué)反應(yīng)儀,、旋渦混合器,、恒流泵、自動部分收集器等十幾個系列產(chǎn)品的廠家,，歡迎大家前來訂購
