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主營產(chǎn)品： 超微量分光光度計(jì),核酸蛋白檢測儀,超微量紫外分光光度計(jì),nano光度計(jì),超微量核酸蛋白檢測儀 |
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2021-5-21 閱讀(2189)
那么下面上海嘉鵬科技有限公司為大家簡單介紹一下關(guān)于什么是凝膠電泳：
電泳是實(shí)驗(yàn)室中常用的一種技術(shù),，用于根據(jù)大小分離帶電分子,，例如DNA。
凝膠電泳是實(shí)驗(yàn)室中常用的一種技術(shù),，用于分離帶電分子,，例如DNA ，RNA 和蛋白質(zhì),。根據(jù)它們的大小,。
當(dāng)電流通過凝膠時(shí)，帶電分子穿過凝膠,。
在凝膠上施加電流,，以使凝膠的一端帶正電荷，而另一端帶負(fù)電荷,。
帶電分子的運(yùn)動稱為遷移,。分子向相反電荷遷移。因此,，帶負(fù)電荷的分子將被拉向正末端（相反的方向吸引?。?/p>
凝膠由可滲透的基質(zhì)（有點(diǎn)像篩子）組成,，當(dāng)電流通過時(shí),，分子可以穿過該基質(zhì)。
較小的分子在凝膠中的遷移速度更快,，因此比較大的分子遷移速度更慢,，因此遷移距離更短,，因此較大的分子可以遷移。結(jié)果,，分子按大小分開,。
凝膠電泳和DNA
電泳使您能夠區(qū)分不同長度的DNA片段。
DNA帶負(fù)電,，因此,，當(dāng)電流施加到凝膠上時(shí)，DNA會向帶正電的電極遷移,。
較短的DNA鏈比較長的DNA鏈穿過凝膠的速度更快,，從而導(dǎo)致片段按大小順序排列。
使用染料,，發(fā)熒光,？標(biāo)簽還是放射性的？標(biāo)記使分離后的凝膠上的DNA可見,。它們將在凝膠上顯示為條帶,。
具有已知長度片段的DNA標(biāo)記通常與樣品同時(shí)在凝膠中穿行。
通過將DNA樣品的條帶與DNA標(biāo)記的條帶進(jìn)行比較,，可以算出樣品中DNA片段的大致長度,。
凝膠電泳如何進(jìn)行？
準(zhǔn)備凝膠
瓊脂糖凝膠,？通常用于可視化DNA片段,。用于制作凝膠的瓊脂糖濃度取決于您正在使用的DNA片段的大小。
瓊脂糖濃度越高,，基質(zhì)越致密,，反之亦然。較小的DNA片段在較高濃度的瓊脂糖上分離,，而較大的分子需要較低濃度的瓊脂糖,。
為了制備凝膠，將瓊脂糖粉與電泳緩沖液混合并加熱至高溫,，直到所有瓊脂糖粉融化為止,。
然后將熔化的凝膠倒入凝膠澆鑄盤中，并在一端放置一個“梳子”,，以制成用于移液的孔,。
凝膠冷卻并固化后（現(xiàn)在將是不透明而不是透明的），將梳子移開,。
現(xiàn)在,，許多人都使用預(yù)制的凝膠。
然后將凝膠放入電泳槽中,，并將電泳緩沖液倒入槽中,，直到覆蓋凝膠表面為止。緩沖器傳導(dǎo)電流,。所用緩沖液的類型取決于樣品中DNA片段的大致大小,。
準(zhǔn)備用于電泳的DNA
在電泳之前將染料添加到DNA樣品中，以增加樣品的粘度,，這將防止其浮出孔,，從而可以看到樣品通過凝膠的遷移。
將DNA標(biāo)記物（也稱為大小標(biāo)準(zhǔn)品或DNA階梯）裝入凝膠的**個孔中,。標(biāo)記中的片段長度已知,，因此可用于幫助估計(jì)樣品中片段的大小。
然后將制備的DNA樣品吸移到凝膠的其余孔中,。
完成此操作后,，將蓋子放在電泳槽上，確保凝膠以及正負(fù)電極的方向正確（我們希望DNA跨凝膠遷移至正端）,。
分離碎片
然后打開電流,，使帶負(fù)電荷的DNA穿過凝膠向凝膠的正側(cè)移動。
較短長度的DNA移動的速度快于較長長度的DNA,，因此在運(yùn)行電流時(shí)移動的距離更遠(yuǎn),。
DNA遷移到凝膠中的距離可以通過監(jiān)視上樣緩沖液染料的遷移來直觀判斷。
留下的電流要足夠長,，以確保DNA片段在凝膠上移動的距離足以將它們分開,，但不要過長以至于它們從凝膠末端流出。
用于按大小分離DNA片段的DNA電泳設(shè)備插圖,。凝膠位于緩沖罐中,。將DNA樣品置于凝膠一端的孔中，并且電流流過凝膠,。帶負(fù)電荷的DNA向正電極移動,。圖片來源：Genome Research Limited
可視化結(jié)果
一旦DNA在凝膠上遷移足夠遠(yuǎn)，就將電流切斷,，并將凝膠從電泳槽中移出,。
為了使DNA可視化，用與DNA結(jié)合的熒光染料對凝膠進(jìn)行染色,，然后將其放在紫外透射儀上,，該透射儀將被染色的DNA顯示為亮帶。
或者,，染料可以在倒入之前與凝膠混合,。
如果凝膠正確運(yùn)行，將可見DNA標(biāo)記物/大小標(biāo)準(zhǔn)品的條帶模式,。
然后可以通過想象一條橫穿DNA標(biāo)記帶的水平線來判斷樣品中DNA的大小,。然后,，您可以通過將它們與標(biāo)記中**接近的條帶進(jìn)行匹配來估計(jì)樣品中DNA的大小。
顯示脫氧核糖核酸帶的例證在凝膠分離了,。將DNA片段的長度與包含已知長度的片段的標(biāo)記進(jìn)行比較,。
以上就是上海嘉鵬科技有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于什么是凝膠電泳。
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