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上海嘉鵬
主營產品： 超微量分光光度計,核酸蛋白檢測儀,超微量紫外分光光度計,nano光度計,超微量核酸蛋白檢測儀 |
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2019-10-29 閱讀(1973)
使用UV法應注意以下環(huán)節(jié)：
1 儀器的校正和檢定：
1．1 波長 由于溫度變化對機械部分的影響,，儀器的波長經常會略有變動,，因此除應定期對所用的儀器進行**校正檢定外,，還應于測定前校正測定波長。
1．2 吸收度 吸收度的準確度可用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定,。
1．3 狹縫寬度 選擇儀器的狹縫寬度,，應以減小狹縫寬度時供試品的吸收度不再增加為準，對于《中藥典》UV法測定的大部分品種,，可以使用2nm縫寬,，但對某些品種如青霉素鉀及鈉的吸收度檢查則需要1nm縫寬或更窄，否則其264nm的吸收度會偏低,。
1．4 天平和玻璃儀器的檢定所用的容量儀器及分析天平應經過檢定,，如有偏差應加上校正值。
1．5 吸收池配對 石英吸收池對紫外光亦有吸收,，1 em的吸收池在波長220～270 nm的范圍內,，以空氣作為，其透光率往往小于,，同時每個吸收池不可能*相同,，故在每次測定前應做吸收池配對試驗,。方法是取干燥潔凈的吸收池,，均裝入測定用空白溶劑,，以只吸收池作空白，用測定時所用的波長測定其他吸收池的吸收度,，后選擇吸收小的只作為配對,，測定并記錄下其它吸收池的吸收度，供試品液的實際吸收度應是與吸收池(有空白溶劑時)吸收度之差,。為減少誤差,，常用個配對杯測定若干樣品(也減少計算麻煩)，但應注意換液時充分洗滌,。
2 對溶劑的要求：由于溶劑與溶質分子間形成氫鍵,、偶化等的影響，可以使溶質吸收波長發(fā)生位移,。通常性溶劑比非性溶劑的影響大,，在選擇溶劑時應予以注意。測定供試品前,，應先檢查所用的溶劑在測定供試品所用的波長附近是否有吸收峰,，是否影響供試品測定。每次測定時應采用同廠,、同批號的試劑配制混合均勻的同批溶劑,。
3 檢驗： 3．1 溶液配制 稱量應按藥典規(guī)定進行。配制測定溶液時稀釋轉移次數(shù)應盡可能少,，轉移稀釋時所取容積般應不少于5mL,。含量測定供試品應稱取2份，如為對照品比較法,，對照品也應稱取2份,。吸收系數(shù)檢查也應稱取供試品2份，平行操作,。每份結果對平均值的偏差應在4-0.5％以內,。作鑒別或檢查時可取樣品1份。
3．2 測定 除另有規(guī)定外,，應在規(guī)定的吸收峰波長4-2 nm以內,，再測試幾個點的吸收度，以核對供試品的吸收峰波長位置是否正確,，除另有規(guī)定外,，吸收峰**長應在該品種項下規(guī)定的波長4-1nm以內，否則應考慮該試樣的真?zhèn)?、純度以及儀器波長的準確度,。取吸收池時，手指拿毛玻璃面的兩側,。樣品溶液的量以池體積的4／5為宜,，使用揮發(fā)性溶液時應加蓋,，透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭干凈，檢視應無殘留溶劑,，為防止溶劑揮發(fā)后溶質殘留在池子的透光面,，可先用蘸有空白溶劑的擦鏡紙擦拭，然后再用干擦鏡紙拭凈,。吸收池放人樣品室時應注意每次放入的方向相同,。使用后用洗滌劑及水沖洗干凈，晾干防塵保存,。吸收池如污染不易洗凈時可用發(fā)煙硫酸+硝酸(3：1 )混合液稍加浸泡后,，洗凈備用。如用鉻酸鉀清潔液清洗時,，吸收池不宜在清潔液中長時間浸泡,，否則清潔液中的鉻酸鉀結晶會損壞吸收池的光學表面，并應充分用水沖洗,，以防鉻酸鉀吸附于吸收池表面,。
