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上海嘉鵬
主營產(chǎn)品： 超微量分光光度計(jì),核酸蛋白檢測儀,超微量紫外分光光度計(jì),nano光度計(jì),超微量核酸蛋白檢測儀 |
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2018-3-6 閱讀(4235)
核酸純化在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)廣泛應(yīng)用,。怎樣獲得高質(zhì)量,、高純度的DNA或RNA樣品對下游實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行至關(guān)重要，因此,，對純化后的核酸進(jìn)行鑒定也是*的步驟,。本文簡單的回顧學(xué)習(xí)一下核酸鑒定的方法。
核酸鑒定包括：濃度/純度鑒定+完整性鑒定
1.濃度/純度鑒定
（1）紫外分光光度計(jì)：
原理：由于核酸中的堿基都具有共軛雙鍵,，所以具有紫外光吸收性質(zhì),。核酸在紫外光譜區(qū)有一條典型的吸收曲線，其吸收高峰在260nm處,，吸收低谷在230nm處。蛋白質(zhì)在紫外區(qū)的吸收高峰在280nm處,，所以核酸的紫外吸收光譜數(shù)據(jù)是鑒定核酸的重要依據(jù)之一,。
由于核苷酸zui大吸收波長為260nm,根據(jù)朗伯-比爾定律可計(jì)算出在波長260nm的紫外線下，1個(gè)OD值的光密度大約相當(dāng)于50µg/ml的雙鏈DNA,， 40µg/ml的單鏈RNA,。紫外分光光度法只適用于測定濃度大于0.25µg/ml的核酸溶液。
計(jì)算公式:
dsDNA（µg/µl）=OD260x50x稀釋倍數(shù)/1000
RNA（µg/µl）=OD260x40x稀釋倍數(shù)/1000
純凈的DNA OD260/OD280=1.8,，制備的樣品DNA比值在1.7-1.9,，若洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液而使用去離子水，比值會偏低，因?yàn)镻H值和離子存在會影響光的吸收值,。
當(dāng)OD260/OD280< 1.7,，表明蛋白質(zhì)含量較高，可用利用酚,、異戊醇抽提,，再用乙醇沉淀去除。
當(dāng)OD260/OD280> 2.0,，表明RNA含量較高,。可用RNaseA消化后再進(jìn)行純化,。
OD260/OD230的值,，一般不小于2.0，若小于2.0,，表明有碳水化合物,、鹽類或有機(jī)試劑污染。
上海嘉鵬科技有限公司專業(yè)生產(chǎn)：紫外分析儀,、三用紫外分析儀,、暗箱式紫外分析儀、暗箱三用紫外分析儀,、暗箱紫外分析儀,、手提式紫外分析儀、三用紫外分析儀暗箱式,、紫外檢測儀,、部分收集器、恒流泵,、蠕動泵,、凝膠成像系統(tǒng)、凝膠成像分析系統(tǒng),、化學(xué)發(fā)光成像分析系統(tǒng),、光化學(xué)反應(yīng)儀、旋渦混合器,、漩渦混合器,、玻璃層析柱、梯度混合器,、梯度混合儀,、核酸蛋白檢測儀、玻璃層析柱,、熒光增白劑測定儀,、餾分收集器、切膠儀、藍(lán)光切膠儀,、層析系統(tǒng)等產(chǎn)品,。咨詢。
