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上海嘉鵬

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核酸鑒定方法之濃度

2018-3-6 閱讀(4324)

核酸純化在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)廣泛應(yīng)用,。怎樣獲得高質(zhì)量、高純度的DNA或RNA樣品對(duì)下游實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行至關(guān)重要,,因此,,對(duì)純化后的核酸進(jìn)行鑒定也是*的步驟,。本文簡(jiǎn)單的回顧學(xué)習(xí)一下核酸鑒定的方法。
核酸鑒定包括:濃度/純度鑒定+完整性鑒定
 
1.濃度/純度鑒定
 
(1)紫外分光光度計(jì):
原理:由于核酸中的堿基都具有共軛雙鍵,,所以具有紫外光吸收性質(zhì),。核酸在紫外光譜區(qū)有一條典型的吸收曲線(xiàn),其吸收高峰在260nm處,,吸收低谷在230nm處,。蛋白質(zhì)在紫外區(qū)的吸收高峰在280nm處,所以核酸的紫外吸收光譜數(shù)據(jù)是鑒定核酸的重要依據(jù)之一,。

由于核苷酸zui大吸收波長(zhǎng)為260nm,根據(jù)朗伯-比爾定律可計(jì)算出在波長(zhǎng)260nm的紫外線(xiàn)下,,1個(gè)OD值的光密度大約相當(dāng)于50µg/ml的雙鏈DNA, 40µg/ml的單鏈RNA,。紫外分光光度法只適用于測(cè)定濃度大于0.25µg/ml的核酸溶液。
 
計(jì)算公式:
dsDNA(µg/µl)=OD260x50x稀釋倍數(shù)/1000
RNA(µg/µl)=OD260x40x稀釋倍數(shù)/1000
 
純凈的DNA OD260/OD280=1.8,,制備的樣品DNA比值在1.7-1.9,,若洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液而使用去離子水,比值會(huì)偏低,,因?yàn)镻H值和離子存在會(huì)影響光的吸收值,。

當(dāng)OD260/OD280< 1.7,表明蛋白質(zhì)含量較高,,可用利用酚,、異戊醇抽提,再用乙醇沉淀去除,。
當(dāng)OD260/OD280> 2.0,,表明RNA含量較高??捎肦NaseA消化后再進(jìn)行純化,。
OD260/OD230的值,一般不小于2.0,,若小于2.0,,表明有碳水化合物、鹽類(lèi)或有機(jī)試劑污染,。
 
上海嘉鵬科技有限公司專(zhuān)業(yè)生產(chǎn):紫外分析儀,、三用紫外分析儀、暗箱式紫外分析儀,、暗箱三用紫外分析儀,、暗箱紫外分析儀、手提式紫外分析儀,、三用紫外分析儀暗箱式,、紫外檢測(cè)儀、部分收集器、恒流泵,、蠕動(dòng)泵,、凝膠成像系統(tǒng)、凝膠成像分析系統(tǒng),、化學(xué)發(fā)光成像分析系統(tǒng),、光化學(xué)反應(yīng)儀、旋渦混合器,、漩渦混合器,、玻璃層析柱、梯度混合器,、梯度混合儀,、核酸蛋白檢測(cè)儀、玻璃層析柱,、熒光增白劑測(cè)定儀,、餾分收集器、切膠儀,、藍(lán)光切膠儀,、層析系統(tǒng)等產(chǎn)品。咨詢(xún),。



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