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主營(yíng)產(chǎn)品： 超微量分光光度計(jì),核酸蛋白檢測(cè)儀,超微量紫外分光光度計(jì),nano光度計(jì),超微量核酸蛋白檢測(cè)儀 |
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主營(yíng)產(chǎn)品： 超微量分光光度計(jì),核酸蛋白檢測(cè)儀,超微量紫外分光光度計(jì),nano光度計(jì),超微量核酸蛋白檢測(cè)儀 |
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2016-8-25 閱讀(3019)
液相色譜儀是一種常用的色譜儀產(chǎn)品,，是利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異,，對(duì)混合物進(jìn)行先分離，而后分析鑒定的儀器,。液相色譜儀的工作原理是什么呢?
液相色譜儀的工作原理
系統(tǒng)由儲(chǔ)液器,、泵、進(jìn)樣器,、色譜柱,、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成,。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng),，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內(nèi),，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),，在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程,，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別,，被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測(cè)器時(shí),，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀,，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來液相色譜儀主要有進(jìn)樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng),、分離系統(tǒng),、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，下面將分別敘述其各自的組成與特點(diǎn),。
進(jìn)樣系統(tǒng)
一般采用隔膜注射進(jìn)樣器或高壓進(jìn)樣間完成進(jìn)樣操作,，進(jìn)樣量是恒定的。這對(duì)提高分析樣品的重復(fù)性是有益的,。
輸液系統(tǒng)
該系統(tǒng)包括高壓泵,、流動(dòng)相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強(qiáng)為l.47～4.4X10Pa,，流速可調(diào)且穩(wěn)定,，當(dāng)高壓流動(dòng)相通過層析柱時(shí)，可降低樣品在柱中的擴(kuò)散效應(yīng),，可加快其在柱中的移動(dòng)速度,，這對(duì)提高分辨率、回收樣品,、保持樣品的生物活性等都是有利的,。流動(dòng)相貯存器和梯度儀，可使流動(dòng)相隨固定相和樣品的性質(zhì)而改變，包括改變洗脫液的極性,、離子強(qiáng)度、PH值,，或改用競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑或變性劑等,。這就可使各種物質(zhì)(即使僅有一個(gè)基團(tuán)的差別或是同分異構(gòu)體)都能獲得有效分離。
分離系統(tǒng)
該系統(tǒng)包括色譜柱,、連接管和恒溫器等,。色譜柱一般長(zhǎng)度為10～50cm(需要兩根連用時(shí)，可在二者之間加一連接管),，內(nèi)徑為2～5mm,，由"不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成，住內(nèi)裝有直徑為5～10μm粒度的固定相(由基質(zhì)和固定液構(gòu)成).固定相中的基質(zhì)是由機(jī)械強(qiáng)度高的樹脂或硅膠構(gòu)成,，它們都有惰性(如硅膠表面的硅酸基因基本已除去),、多孔性(孔徑可達(dá)1000?)和比表面積大的特點(diǎn)，加之其表面經(jīng)過機(jī)械涂漬(與氣相色譜中固定相的制備一樣),，或者用化學(xué)法偶聯(lián)各種基因(如磷酸基,、季胺基、羥甲基,、苯基,、氨基或各種長(zhǎng)度碳鏈的烷基等)或配體的有機(jī)化合物。因此,，這類固定相對(duì)結(jié)構(gòu)不同的物質(zhì)有良好的選擇性,。例如，在多孔性硅膠表面偶聯(lián)豌豆凝集素(PSA)后,，就可以把成纖維細(xì)胞中的一種糖蛋白分離出來,。
另外，固定相基質(zhì)粒小,，柱床極易達(dá)到均勻,、致密狀態(tài)，極易降低渦流擴(kuò)散效應(yīng),?；|(zhì)粒度小，微孔淺,，樣品在微孔區(qū)內(nèi)傳質(zhì)短,。這些對(duì)縮小譜帶寬度、提高分辨率是有益的,。根據(jù)柱效理論分析,，基質(zhì)粒度小，塔板理論數(shù)N就越大,。這也進(jìn)一步證明基質(zhì)粒度小,，會(huì)提高分辨率的道理,。
再者，液相色譜的恒溫器可使溫度從室溫調(diào)到60C,，通過改善傳質(zhì)速度,，縮短分析時(shí)間，就可增加層析柱的效率,。
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