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分析酶標儀的免疫吸附試驗原理

時間:2016-3-14閱讀:2238
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酶標儀是我們生活中應用的非常廣泛的醫(yī)療設備,下面就酶標儀的免疫吸附試驗的基本原理講解一下:
(一)先將過量的特異抗體(或抗原)包被于載體(酶標板)上,,通過抗原抗體反應使待側物質(抗原或抗體)和酶標記物(用HRP-辣根過氧化物酶標記的抗體或抗原)也結合在載體上(固相分離),,經(jīng)洗滌去除游離的酶標記物后,,加入底物,,已經(jīng)結合在載體上的標記酶促使底物顯色,。終利用光電比色法,,對待測物進行定性判斷或定量測定,。以上方法的檢驗靈敏度可以達到ng/ml水平。
(二)包被酶標板:將特異抗原溶液加入酶標板孔內,,4℃過夜,。然后用洗滌液洗滌3次到5次(洗板機洗板),這樣溶液中的特異抗原被牢固吸附在酶標板的微孔表面,,形成固相抗原,,殘液及雜質被清洗掉。
(三)加入被測樣本液(病人血清):樣本液中若含有待測抗體,,經(jīng)過溫育反應,,則與已包被的抗原產(chǎn)生特異結合,生成包被抗原與待測抗體的復合物,,被吸附在酶標板的微孔表面,。然后再次進行洗滌,去除殘液及干擾物質,。
(四)加酶結合物:經(jīng)過溫育反應,,生成包被抗原加待測抗體加酶標抗原的三者復合物,同樣被吸附在微孔表面,,然后再次洗滌,去除游離的或非特異沾附的酶結合物(洗板),。
(五)加顯色液:經(jīng)過10分鐘到20分鐘的顯色反應,,被吸附的復合物中的酶與顯色底物液生成有色溶液。此時,,由于游離或非特異吸附的酶已被清除,,所以溶液顏色的深淺,僅決定于已與待測物結合的酶的量,,因此能真實反映待測物的濃度,。被固化的酶越多,顯色就會越深,,這就說明待測物的濃度越大,。
(六)加終止液:終止顯色反應,。
使用酶標儀檢驗:把完成顯色的酶標板放在酶標儀儀器上進行光電比色檢驗,儀器分別檢測空白孔,、陰陽性對照孔,、標準孔、質控孔和患者樣本孔的吸光度值,,并自動按程序要求計算出患者樣本中待測物的濃度或進行定性分析,。

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