(一)先將過量的特異抗體（或抗原）包被于載體（酶標(biāo)板）上,，通過抗原抗體反應(yīng)使待側(cè)物質(zhì)（抗原或抗體）和酶標(biāo)記物（用HRP-辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體或抗原）也結(jié)合在載體上（固相分離），經(jīng)洗滌去除游離的酶標(biāo)記物后,，加入底物,，已經(jīng)結(jié)合在載體上的標(biāo)記酶促使底物顯色。終利用光電比色法,，對待測物進(jìn)行定性判斷或定量測定,。以上方法的檢驗(yàn)靈敏度可以達(dá)到ng/ml水平。

（二）包被酶標(biāo)板：將特異抗原溶液加入酶標(biāo)板孔內(nèi),，4℃過夜,。然后用洗滌液洗滌3次到5次（洗板機(jī)洗板），這樣溶液中的特異抗原被牢固吸附在酶標(biāo)板的微孔表面,，形成固相抗原,，殘液及雜質(zhì)被清洗掉。

（三）加入被測樣本液（病人血清）：樣本液中若含有待測抗體,，經(jīng)過溫育反應(yīng),，則與已包被的抗原產(chǎn)生特異結(jié)合，生成包被抗原與待測抗體的復(fù)合物,，被吸附在酶標(biāo)板的微孔表面,。然后再次進(jìn)行洗滌，去除殘液及干擾物質(zhì),。

（四）加酶結(jié)合物：經(jīng)過溫育反應(yīng),，生成包被抗原加待測抗體加酶標(biāo)抗原的三者復(fù)合物，同樣被吸附在微孔表面,，然后再次洗滌,，去除游離的或非特異沾附的酶結(jié)合物（洗板）。

（五）加顯色液：經(jīng)過10分鐘到20分鐘的顯色反應(yīng),，被吸附的復(fù)合物中的酶與顯色底物液生成有色溶液,。此時(shí)，由于游離或非特異吸附的酶已被清除,，所以溶液顏色的深淺,，僅決定于已與待測物結(jié)合的酶的量，因此能真實(shí)反映待測物的濃度,。被固化的酶越多,，顯色就會越深，這就說明待測物的濃度越大,。

（六）加終止液：終止顯色反應(yīng),。

使用酶標(biāo)儀檢驗(yàn)：把完成顯色的酶標(biāo)板放在酶標(biāo)儀儀器上進(jìn)行光電比色檢驗(yàn)，儀器分別檢測空白孔,、陰陽性對照孔,、標(biāo)準(zhǔn)孔、質(zhì)控孔和患者樣本孔的吸光度值,，并自動按程序要求計(jì)算出患者樣本中待測物的濃度或進(jìn)行定性分析,。