大鼠胞外5’-核苷酸酶(NT5E)檢測試劑盒在一步法測定中,，當標本中受檢抗原的含量很高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合,，而不再形成"夾心復合物",。類同于沉淀反應中抗原過剩的后帶現(xiàn)象，此時反應后顯色的吸光值（位于抗原過剩帶上）與標準曲線（位于抗體過剩帶上）某一抗原濃度的吸光值相同,，如按常法測讀,，所得結果將低于實際的含量，這種現(xiàn)象被稱為鉤狀效應（hook effect）,，因為標準曲線到達高峰后呈鉤狀彎落,。鉤狀效應嚴重時，大鼠胞外5’-核苷酸酶(NT5E)檢測試劑盒反應甚至可不顯色而出現(xiàn)假陰性結果,。因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質（例如血清中HBsAg,、AFP和尿液hCG等）時，應注意可測范圍的zui高值,。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應,。假使在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇，例如HBsAg的a決定簇,，也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結合物,。但在HBsAg的檢測中應注意亞型問題，大鼠胞外5’-核苷酸酶(NT5E) 檢測試劑盒HBsAg有adr,、adw,、ayr、ayw4個亞型,，雖然每種亞型均有相同的a決定簇的反應性,，這也是用單抗作夾心法應注意的問題。

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