大鼠T-細胞激活連接蛋白(LAT)檢測試劑盒的對照說明

1.封閉時間改用37度2h,，是4度24h

2.洗板改成5次以上

以上為了保證減少非特異性吸附造成的顯色,，影響對結(jié)果的判斷和分析,。

結(jié)果顯示：1：10,、1：100、1：200,、1：400的陰,、陽血清均隨抗原呈現(xiàn)剃度變化。

陽性血清呈梯度變化是可以理解的,，但陰性血清不該這么明顯,，原因有二：a.包被抗原量不足，大鼠T-細胞激活連接蛋白(LAT)檢測試劑盒封閉不夠充分,，導(dǎo)致板條仍有未封閉的位點,，可以和酶標抗體結(jié)合，自然包被抗原量越多,，位點越少,，則顯色越弱,。b.陰性血清稀釋度過低,，導(dǎo)致仍存在非特異的結(jié)合,，在封閉*的情況下，要保證陰性血清OD值低,，根據(jù)具體情況可以稀釋到1000倍或以上都可以。

抗原空白對照背景低,，但一抗空白對照背景高,，甚至比陰性血清OD值高。

這點用封閉不*比較好解釋,，陰性血清在這里相當(dāng)于起了一個封閉作用,，酶標抗體結(jié)合少了，顯色自然低了,。

大鼠T-細胞激活連接蛋白(LAT)檢測試劑盒另外1：10稀釋的陰性血清和陽性血清OD值相差較大,，這與報道較多的1：100稀釋效果好有些出入,，不知是否可以用于以后檢測時的稀釋倍數(shù)？,？以上原因是否與包被抗原未進行較高提純以及封閉有關(guān),？

OD值相差較大，但首先要看陰性對照的本底如何（較空白空如何）,？如果本底高,，是會對結(jié)果造成影響的。這里需要找出稀釋度,。

大鼠T-細胞激活連接蛋白(LAT)檢測試劑盒抗原的提純是取決于抗體特異性的,，如果所使用的為單抗，對抗原純度要求可以不高,，但是如果是多抗,，那么抗原不純將容易引起非特異性的顯色。

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