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人蛋白二硫化物異構(gòu)酶A3(PDIA3)ELISA試劑盒實(shí)際應(yīng)用中,，通過(guò)不同的設(shè)計(jì),，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測(cè)抗體的間接法,、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等,。目前我們對(duì)客戶(hù)提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法服務(wù)。

雙抗體夾心法(檢測(cè)未知抗原)

間接法(檢測(cè)未知抗體)

1,、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml,。在反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 一晚,。次日,，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次,。
2,、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌(同時(shí)做空白孔,，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔),。
3、加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml,。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌,。
4,、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘,。
5,、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+"、“-"號(hào)表示,。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上,，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處,，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性,。

1,、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml，每孔加0.1ml,，4℃一晚,。次日洗滌3次。
2,、加樣：加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌,。(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)
3,、加酶標(biāo)抗體：于反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.05ml，37℃孵育30-60分鐘,，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌,。
4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘,。
5,、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+"、“-"號(hào)表示,。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上,，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處,，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性,。

1,。人蛋白二硫化物異構(gòu)酶A3(PDIA3)ELISA試劑盒的測(cè)定應(yīng)進(jìn)行對(duì)EDTA血漿。

2,。對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè),，重復(fù)400毫升EDTA血漿是必需的。

3,。在一個(gè)薰衣草[ EDTA管收集全血]。

4,。應(yīng)及時(shí)將血漿分離,，優(yōu)選地在冷藏的離心機(jī)，并儲(chǔ)存在20°C或更低,。

5,。EDTA血漿樣品可以存儲(chǔ)長(zhǎng)達(dá)8小時(shí)在2，8°

6,。EDTA血漿樣品冷凍在–20°C穩(wěn)定長(zhǎng)達(dá)4個(gè)月,。

人蛋白二硫化物異構(gòu)酶A3(PDIA3)ELISA試劑盒除了非零校準(zhǔn)所有的試劑，試劑盒控制,，洗精準(zhǔn)備使用,。非標(biāo)準(zhǔn)/校準(zhǔn)器的制備對(duì)于每個(gè)非零校準(zhǔn)（校準(zhǔn)B通過(guò)F）和試劑盒對(duì)照1和2，使每個(gè)用蒸餾水或去離子水混合2毫升小瓶,。

讓瓶子站立10分鐘,，然后混合*的溫柔的反演，以確保完成重組。使用校準(zhǔn)和控制等盡可能重建,。凍結(jié)（20攝氏度）剩余的校準(zhǔn)和控制盡快使用后,。校準(zhǔn)和控制在–20°C穩(wěn)定6周后重建與3次凍融建議在程序中處理時(shí)的周期。洗滌濃縮液混洗濃縮物,。如果沉淀是由于在洗滌濃縮物低溫貯藏,，如4°C，溶解放置在一個(gè)37°C水浴或烤箱的小瓶旋轉(zhuǎn)或攪拌,。增加洗滌濃縮液（30毫升）570毫升蒸餾水或去離子水混合,。人蛋白二硫化物異構(gòu)酶A3(PDIA3)ELISA試劑盒的稀釋液穩(wěn)定90天在室溫下儲(chǔ)存（18－26攝氏度）。儲(chǔ)存/穩(wěn)定性?xún)?chǔ)存所有的試劑在2,，8°C,，除了洗滌集中，應(yīng)保持在室溫下直到稀釋?zhuān)员苊獬恋怼?/span>

183Hu   人E2F轉(zhuǎn)錄因子3(E2F3)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for E2F Transcription Factor 3 (E2F3)
klJ182Hu   人E2F轉(zhuǎn)錄因子2(E2F2)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for E2F Transcription Factor 2 (E2F2)
klD060Hu   人70kDa熱休克蛋白2(HSPA2)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Heat Shock 70kDa Protein 2 (HSPA2)
klE578Hu   人B-細(xì)胞淋巴瘤因子11A(Bcl11A)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for B-HZll CLL/Lymphoma 11A (Bcl11A)
klH868Hu   人含Patatin樣磷脂酶域蛋白3(PNPLA3)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Patatin Like Phospholipase Domain Containing Protein 3 (PNPLA3)
klG799Hu   人精脒/精胺N1-乙?；D(zhuǎn)移酶1(SAT1)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Spermidine/Spermine N1-AHZtyltransferase 1 (SAT1)
klH541Hu   人神經(jīng)損傷誘導(dǎo)蛋白1(NINJ1)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Ninjurin 1 (NINJ1)
klD504Hu   人熱休克蛋白β3(HSPβ3)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Heat Shock Protein Beta 3 (HSPb3)
klD505Hu   人熱休克蛋白β7(HSPβ7)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Heat Shock Protein Beta 7 (HSPb7)
klC020Hu   人S100鈣結(jié)合蛋白A4(S100A4)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for S100 Calcium Binding Protein A4 (S100A4)
klB284Hu   人乙酰輔酶A羧化酶α(ACACα)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for AHZtyl Coenzyme A Carboxylase Alpha (ACACa)
klG262Hu   人蛋白酶體亞基α7(PSMα7)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Proteasome Subunit Alpha Type 7 (PSMa7)
klG260Hu   人蛋白酶體亞基α5(PSMα5)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Proteasome Subunit Alpha Type 5 (PSMa5)
klB523Hu   人趨化因子C-X3-C-基元受體1(CX3CR1)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Chemokine C-X3-C-Motif ReHZptor 1 (CX3CR1)
klH430Hu   人丙酮酸羧化酶(PC)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Pyruvate Carboxylase (PC)
klL148Hu   人Notch同源物2(NOTCH2)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Notch Homolog 2 (NOTCH2)
klE330Hu   人Rho GDP解離抑制因子β(ARHGDIβ)ELISA試劑盒*   ELISA Kit for Rho GDP Dissociation Inhibitor Beta (ARHGDIb)