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人磷酸化乙酰輔酶A(PaCoA)ELISA試劑盒實際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計,，具體的方法步驟可有多種,。即：用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等,。目前我們對客戶提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法服務(wù),。

雙抗體夾心法(檢測未知抗原)

間接法(檢測未知抗體)

1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml,。在反應(yīng)孔中加0.1ml,，4℃ 一晚。次日,，棄去孔內(nèi)溶液,，用洗滌緩沖液洗3次。
2,、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔,，陰性對照孔及陽性對照孔),。
3、加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml,。37℃ 孵育0.5～1小時,，洗滌。
4,、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃ 10～30分鐘。
5,、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml
6,、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,，陽性程度越強,，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+",、“-"號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上,，于450nm(若以ABTS顯色,，則410nm)處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,，即為陽性,。

1,、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml，每孔加0.1ml,，4℃一晚,。次日洗滌3次。
2,、加樣：加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌,。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)
3,、加酶標(biāo)抗體：于反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.05ml，37℃孵育30-60分鐘,，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌,。
4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃ 10～30分鐘,。
5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml
6,、結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,，陽性程度越強，陰性反應(yīng)為無色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+"、“-"號表示,。也可測OD值：在ELISA檢測儀上,，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處,，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性,。

1,。人磷酸化乙酰輔酶A(PaCoA)ELISA試劑盒的測定應(yīng)進行對EDTA血漿。

2,。對樣品進行檢測,，重復(fù)400毫升EDTA血漿是必需的。

3,。在一個薰衣草[ EDTA管收集全血],。

4。應(yīng)及時將血漿分離,，優(yōu)選地在冷藏的離心機,，并儲存在20°C或更低。

5,。EDTA血漿樣品可以存儲長達8小時在2,，8°

6。EDTA血漿樣品冷凍在–20°C穩(wěn)定長達4個月,。

人磷酸化乙酰輔酶A(PaCoA)ELISA試劑盒除了非零校準(zhǔn)所有的試劑,，試劑盒控制，洗精準(zhǔn)備使用,。非標(biāo)準(zhǔn)/校準(zhǔn)器的制備對于每個非零校準(zhǔn)（校準(zhǔn)B通過F）和試劑盒對照1和2,，使每個用蒸餾水或去離子水混合2毫升小瓶。

讓瓶子站立10分鐘,，然后混合*的溫柔的反演,，以確保完成重組。使用校準(zhǔn)和控制等盡可能重建,。凍結(jié)（20攝氏度）剩余的校準(zhǔn)和控制盡快使用后,。校準(zhǔn)和控制在–20°C穩(wěn)定6周后重建與3次凍融建議在程序中處理時的周期。洗滌濃縮液混洗濃縮物。如果沉淀是由于在洗滌濃縮物低溫貯藏,，如4°C,，溶解放置在一個37°C水浴或烤箱的小瓶旋轉(zhuǎn)或攪拌。增加洗滌濃縮液（30毫升）570毫升蒸餾水或去離子水混合,。人磷酸化乙酰輔酶A(PaCoA)ELISA試劑盒的稀釋液穩(wěn)定90天在室溫下儲存（18－26攝氏度）,。儲存/穩(wěn)定性儲存所有的試劑在2，8°C,，除了洗滌集中,，應(yīng)保持在室溫下直到稀釋，以避免沉淀,。

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