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人皮質(zhì)醇(Cortisol)ELISA試劑盒實(shí)際應(yīng)用中,，通過不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種,。即：用于檢測(cè)抗體的間接法,、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。目前我們對(duì)客戶提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法服務(wù),。

雙抗體夾心法(檢測(cè)未知抗原)

間接法(檢測(cè)未知抗體)

1,、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應(yīng)孔中加0.1ml,，4℃ 一晚,。次日，棄去孔內(nèi)溶液,，用洗滌緩沖液洗3次,。
2,、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí),。然后洗滌(同時(shí)做空白孔,，陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔)。
3,、加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí),，洗滌,。
4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃ 10～30分鐘,。
5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml
6,、結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng),，陰性反應(yīng)為無色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+",、“-"號(hào)表示,。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色,，則410nm)處,，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,，即為陽性,。

1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml,，每孔加0.1ml,，4℃一晚。次日洗滌3次,。
2,、加樣：加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空白,、陰性及陽性孔對(duì)照)
3,、加酶標(biāo)抗體：于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.05ml,，37℃孵育30-60分鐘,，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌,。
4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃ 10～30分鐘,。
5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml
6,、結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng),，陰性反應(yīng)為無色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+",、“-"號(hào)表示,。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm(若以ABTS顯色,，則410nm)處,，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,，即為陽性,。

1。人皮質(zhì)醇(Cortisol)ELISA試劑盒的測(cè)定應(yīng)進(jìn)行對(duì)EDTA血漿,。

2,。對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)，重復(fù)400毫升EDTA血漿是必需的,。

3,。在一個(gè)薰衣草[ EDTA管收集全血]。

4,。應(yīng)及時(shí)將血漿分離,，優(yōu)選地在冷藏的離心機(jī)，并儲(chǔ)存在20°C或更低,。

5,。EDTA血漿樣品可以存儲(chǔ)長(zhǎng)達(dá)8小時(shí)在2,，8°

6,。EDTA血漿樣品冷凍在–20°C穩(wěn)定長(zhǎng)達(dá)4個(gè)月。

人皮質(zhì)醇(Cortisol)ELISA試劑盒除了非零校準(zhǔn)所有的試劑,，試劑盒控制,，洗精準(zhǔn)備使用。非標(biāo)準(zhǔn)/校準(zhǔn)器的制備對(duì)于每個(gè)非零校準(zhǔn)（校準(zhǔn)B通過F）和試劑盒對(duì)照1和2,，使每個(gè)用蒸餾水或去離子水混合2毫升小瓶,。

讓瓶子站立10分鐘,，然后混合*的溫柔的反演，以確保完成重組,。使用校準(zhǔn)和控制等盡可能重建,。凍結(jié)（20攝氏度）剩余的校準(zhǔn)和控制盡快使用后。校準(zhǔn)和控制在–20°C穩(wěn)定6周后重建與3次凍融建議在程序中處理時(shí)的周期,。洗滌濃縮液混洗濃縮物,。如果沉淀是由于在洗滌濃縮物低溫貯藏，如4°C,，溶解放置在一個(gè)37°C水浴或烤箱的小瓶旋轉(zhuǎn)或攪拌,。增加洗滌濃縮液（30毫升）570毫升蒸餾水或去離子水混合。人皮質(zhì)醇(Cortisol)ELISA試劑盒的稀釋液穩(wěn)定90天在室溫下儲(chǔ)存（18－26攝氏度）,。儲(chǔ)存/穩(wěn)定性儲(chǔ)存所有的試劑在2,，8°C，除了洗滌集中,，應(yīng)保持在室溫下直到稀釋,，以避免沉淀。

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