關(guān)于ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)邊緣效應(yīng)問題的分析

我們在使用ELISA試劑盒96孔板的實(shí)驗(yàn)測定的時候,，常發(fā)現(xiàn)有“邊緣效應(yīng)",，也就是外周孔顯色較 中心孔深。經(jīng)研究證實(shí)在溫育中的熱力學(xué)梯度可能是根本原因之所,。聚苯乙烯本身為不良熱導(dǎo)體,，在實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)ELISA測定中，將板從室溫（通常在25℃左右）置于37℃溫箱,，板也升溫時,，在外周孔與中心孔之間可能存在一熱力學(xué)梯度。因此使用水浴或在將反應(yīng)溶液加入至板孔中時,，將板和溶液均加熱至溫育溫度（如37℃）,，就可以很容易地排除“邊緣效應(yīng)"，并且可提高測定的重復(fù)性,。 
    還有就是在實(shí)驗(yàn)中,，必然有使用微量加樣器加入樣本的步驟。提醒注意：加樣不可太快,，要避免加在孔壁上部,，不可濺出和產(chǎn)生氣泡。ELISA試劑盒太快的話無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性,。加在孔壁上部的非包被區(qū),，易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產(chǎn)生污染,。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異,。所以，有時候一份標(biāo)本用相同的試劑盒這次測定為陽性,，下次測定為陰性,，往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致,。
    ELISA試劑盒使用時一定要根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要購買提取試劑盒，如果不是試劑盒,，或許能提出RNA,，但不能確保其質(zhì)量以及完整性,。