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ELISA試劑盒特別的包被方式

時間:2017-3-6閱讀:1009
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ELISA試劑盒特別的包被方式
ELISA試劑盒這以后經(jīng)過抗原抗體反響使抗原固相化。此直接在固相上的抗原遠離載體外表,,其抗原決定簇也得以充分露出。直接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析效果,,人elisa試劑盒包被在固相上的抗原純度大大提高,,因而含雜質較多的抗原也可采用捕獲包被法,實驗的特異性、敏感性均由此得以改進,,重復性亦佳,。直接包被 的另一長處是抗原用量少,僅為直接包被的1/10乃至于/100,。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質抗原可采用,。例如,在檢查抗DNA抗體時,,需用 DNA作為包被抗原,,而遍及的固相載體通常不能直接與核酸。
辦法二 用于檢查不知道抗體的直接法: 用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,, 每孔加0.1ml,,4℃一夜。次日洗刷3次,。

ELISA試劑盒加必定稀釋的待檢樣品(不知道抗體)0.1ml于上述已包被的反響孔
中,置37℃孵育1小時,洗刷,。(一起做空白、陰性及陽性孔對照)

于反響孔中,,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml,,
37℃孵育30-60分鐘,洗刷,zui終一遍用DDW洗刷,。

其他步驟同“雙抗體夾心法"的4,、5、6,。
ELISA試劑盒將抗原或抗體固定在進程稱為包被,。換言之,包被便是抗原或抗體到固相載體外表的進程,。蛋白質與聚苯乙烯固相載體是經(jīng)過物理吸附的,,靠的是蛋白質分子 構造上的疏水基團與固相載體外表的疏水基團間的效果。這種物理吸附對錯特異性的,,受蛋白質的分子量,、等電點、人ELISA試劑盒濃度等的影響,。載體對不一樣 蛋白質的吸附才能是不相同的,,大分子蛋白質較小分子蛋白質通常富含更多的疏水基團,,因而更易吸附到固相載體外表。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強的吸附 力,,其聯(lián)合多發(fā)生在Fc段上,,抗體點露出于外,因而抗體的包被通常均采用直接吸附法,。

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