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一種新型的實(shí)時(shí)細(xì)胞分析系統(tǒng)來檢測病毒導(dǎo)致的細(xì)胞病變以及中和抗體對2009年的H1N1病毒的效力
RTCA系統(tǒng)是由四個(gè)部件組成:一個(gè)電子傳感器、一個(gè)機(jī)械裝置,、E-plate,、一個(gè)軟件控制單元。機(jī)械裝置放在組織培養(yǎng)箱中,,能夠利用電子傳感器檢測E-plate上每個(gè)孔的電阻,。在控制軟件的控制之下,CI是基于電子的阻抗,,是細(xì)胞生長狀況的代表,。為了檢測實(shí)時(shí)分析細(xì)胞的擴(kuò)增情況,。
為了獲得背景值,我們首先添加50ul的細(xì)胞培養(yǎng)基到96孔E-plate的每一個(gè)孔中,,然后將每100ul培養(yǎng)基含有2倍濃度的MDCK細(xì)胞(稀釋梯度從4.0X104到2.5X103)接種到E-plate,。將包含細(xì)胞的96孔E-PLATE放到室溫孵育30min,然后放到位于培養(yǎng)箱中的RTCA SP/MP裝置中,,細(xì)胞值每15min自動(dòng)檢測一次,。為了檢測*的TPCK-trypsin濃度,我們做了一個(gè)將細(xì)胞放在含有TPCK-trypsinDMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn),,當(dāng)細(xì)胞達(dá)到預(yù)期時(shí),,將
E-plate從RTCA系統(tǒng)中拿出,用DMEM培養(yǎng)基沖洗兩次,。然后添加150ul的包含有TPCK-trypsin的MEM培養(yǎng)基(終濃度為10–0.31 mg/mL),。將E-PLATE立刻放到裝置中,繼續(xù)檢測CI值
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