常見的細(xì)胞污染分為以下幾類∶
細(xì)胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有好幾種,，分別是細(xì)菌污染、支原體污染,、黑膠蟲污染,、真菌污染、以及細(xì)胞交叉污染,。他們在細(xì)胞培養(yǎng)中污染的特點(diǎn)如下：
一：細(xì)菌污染
細(xì)菌污染：細(xì)菌是一種原核細(xì)胞微生物,，其大小以微米(μm)計(jì)。常見的污染細(xì)菌有革蘭氏陰性菌和大腸桿菌,、假單胞菌等,，革蘭氏陰性菌中白色葡萄球菌等比較常見。
一旦發(fā)生細(xì)菌污染較易發(fā)現(xiàn),，多數(shù)情況下培養(yǎng)液短期內(nèi)顏色變黃,，表明有大量酸性物質(zhì)產(chǎn)生，出現(xiàn)明顯混濁現(xiàn)象,；有時靜置的培養(yǎng)液液體初看不混濁,，但稍加振蕩，就有很多混濁物漂起,。倒置顯微鏡下觀察,，可見培養(yǎng)液中有大量圓球狀顆粒漂浮。必要時可取少量培養(yǎng)液涂片染色檢查以證實(shí)細(xì)菌種類,；有的培養(yǎng)液改變不明顯而又疑有污染,，可取出少量培養(yǎng)液用普通肉湯接種或用未加雙抗藥物的培養(yǎng)液接種，也可取10ml細(xì)胞懸液以100rpm離心5min，沉淀中加入無抗生素的培養(yǎng)液2ml,，置于37℃培養(yǎng),，24h可得結(jié)果。污染后細(xì)胞發(fā)生病理改變,，胞內(nèi)顆粒增多,、增粗，最后變圓脫落死亡,，造成試驗(yàn)失敗和細(xì)胞株(系)丟失,。
看到這種，別猶豫了你的細(xì)胞被污染了,，那么怎么辦呢,，基本原則立馬扔掉，別擴(kuò)大污染,，如果你的細(xì)胞真的十分寶貴,，先用帶有雙抗的PBS反復(fù)沖洗幾遍，然后再培養(yǎng)液中加入硫酸慶大霉素,、新霉素（50ug/ml）等,，培養(yǎng)3天后換成帶有雙抗的培養(yǎng)液培養(yǎng)。
二.支原體污染
特征：最小的微生物,，無法通過光學(xué)顯微鏡看見,，但可通過電鏡觀察到。感染支原體的細(xì)胞,，在某一時間點(diǎn)碎片突然增多，隨著傳代,，細(xì)胞狀態(tài)顯著變差,。支原體污染可通過氣溶膠傳播，影響同一細(xì)胞房其他細(xì)胞,。
鑒定方法：PCR法,、顯色法、熒光染色法等,。
處理方法：若細(xì)胞狀態(tài)尚可,，添加支原體抑制劑培養(yǎng)2-3代可轉(zhuǎn)陰；若細(xì)胞狀態(tài)很差,，建議消殺后丟棄,。
三、黑膠蟲污染
特征：無明確定義,，鏡下無法直接觀察到,。主要表現(xiàn)為細(xì)胞狀態(tài)差，黑點(diǎn)和碎片多,，布朗運(yùn)動,。通過檢測發(fā)現(xiàn)主要為支原體污染,，部分為未知的增殖不明顯的微生物污染。
處理方式：若細(xì)胞狀態(tài)尚可,，添加黑膠蟲/支原體抑制劑培養(yǎng)2-3代可轉(zhuǎn)陰,；若細(xì)胞狀態(tài)很差，建議消殺后丟棄,。
四,、真菌污染
特征：呈鏈球狀或絲狀。常形成肉眼可見的菌落,，培養(yǎng)基顏色無變化或變紫,，僅對局部細(xì)胞影響較大，其他地方生長正常,。會形成孢子,，容易污染其他細(xì)胞。
處理方法：真菌污染較難除,，不建議保留,，建議消殺后丟棄。
五,、細(xì)胞交叉污染
特征：即不同的細(xì)胞混雜在一起
鑒定方法：
同種屬：STR鑒定,，多等位基因數(shù)大于3個。
（需考慮本身的遺傳背景,，如EA.hy 926為融合細(xì)胞,，本身就包含兩套遺傳信息）
不同種屬：PCR法，對種屬特異性基因進(jìn)行擴(kuò)增,，不同種屬產(chǎn)物大小不同,。
處理方法：建議重新引種。
六,、細(xì)胞污染的處理
應(yīng)對細(xì)胞污染的最好對策是預(yù)防!預(yù)防!再預(yù)防!養(yǎng)細(xì)胞要勤快,，平時所用到的耗材、器皿等要及時高壓滅菌,，滅菌后超過一周未使用也應(yīng)重新滅菌,。配制的培養(yǎng)基、胰酶,、PBS等最好在一周內(nèi)用完,。同時，也應(yīng)每天查看一下細(xì)胞狀態(tài),。在細(xì)胞房內(nèi)應(yīng)盡量少地走動,，盡量少地說話，若咳嗽或噴嚏時務(wù)必背向超凈臺。
細(xì)胞污染后處理方式是丟棄,。當(dāng)個別細(xì)胞十分珍貴無法丟棄時可盡力“急救"一下,。
那么如何急救呢?
1，判斷污染源,。一旦發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染的跡象或已污染,，立即判斷可能的污染源︰有無操作不當(dāng)?培養(yǎng)基、胰酶,、PBS等顏色,、澄清度是否正常?
2，及時處理,。若確定現(xiàn)有的培養(yǎng)基,、胰酶、PBS可用,，則繼續(xù)使用;若無法確定則新配培養(yǎng)基,、PBS、胰酶,，原有的液體在確定是否污染后再做處理,。
現(xiàn)以貼壁細(xì)胞為例向大家介紹下細(xì)菌污染時如何“急救"∶
1)，立即棄去培養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)基,，以PBS潤洗2~3次,，加入胰酶處理至細(xì)胞形態(tài)略有改變但未脫離容器時棄去胰酶，加入PBS輕輕潤洗1遍;
2),，加入20×雙抗,，浸泡細(xì)胞3~5min，棄去雙抗;
3),，加入新鮮的培養(yǎng)基(含10×雙抗)培養(yǎng)12 h;
4),，12 h棄去培養(yǎng)基以PBS潤洗2~3遍后加入培養(yǎng)基(含10×雙抗);
5)，傳代時以較小轉(zhuǎn)速離心(如平時以1000 r/min離心,，則可降為800~900r/min離心)，仍以含10×雙抗的培養(yǎng)基培養(yǎng);
6),，若第二代后鏡下找不到細(xì)菌,，則第三代起可正常培養(yǎng)。正常培養(yǎng)48 h后無反彈則可認(rèn)為污染已清除,。
若為霉菌污染,，在以PBS潤洗2~3遍后換液，無需加入高濃度雙抗,。培養(yǎng)48 h后污染未再次出現(xiàn)即可,。
若為真菌污染，在PBS潤洗、換液后可加入兩性霉素B(兩性霉素B有細(xì)胞毒性,，不推薦使用),，也可加入300 ug/mL氟康唑培養(yǎng)，污染控制后改用150 ug/mL培養(yǎng)2~3代,。
若懷疑支原體污染,，則可進(jìn)行PCR檢測或直接使用支原體清除試劑(如∶某恒生物)。也可購買環(huán)丙沙星注射液,，于超凈臺內(nèi)打開直接添加到培養(yǎng)基中,，以20 ug/mL濃度2代后改用10 ug/mL濃度持續(xù)培養(yǎng)約2周。
附∶常用抗生素劑量和抗菌范圍
上?？道噬锟萍加邢薰?
