1,、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法：

陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷,，能與核酸的磷酸根通過靜電作用，將DNA分子包裹入內(nèi),，形成DNA脂復(fù)合物,，也能被表面帶負(fù)電的細(xì)胞膜吸附，再通過融合或細(xì)胞內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞,。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細(xì)胞中,，是目前實(shí)驗(yàn)室的轉(zhuǎn)染方法之一，其轉(zhuǎn)染率較高,，優(yōu)于磷酸鈣法,。由于脂質(zhì)體對(duì)細(xì)胞有一定的毒性，所以轉(zhuǎn)染時(shí)間一般不超過24小時(shí),。常用細(xì)胞類型:cos-7 ,、BHK、NIH3T3 ,、Hela等,。

優(yōu)點(diǎn)：操作簡單、轉(zhuǎn)染率高,、可轉(zhuǎn)染DNA,、RNA蛋白質(zhì)。

缺點(diǎn)：有些細(xì)胞系不容易轉(zhuǎn)染,，需要進(jìn)行條件優(yōu)化,，

2.電穿孔轉(zhuǎn)染法：

電流能夠可逆地?fù)舸┘?xì)胞膜形成瞬時(shí)的水通路或膜上小孔促使DNA分子進(jìn)入胞內(nèi)，這種方法就是電穿孔,。當(dāng)遇到某些脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率很低或幾乎無法轉(zhuǎn)入時(shí)建議用電穿孔法轉(zhuǎn)染。一般情況下,，高電場強(qiáng)度會(huì)殺死50%-70% 的細(xì)胞?，F(xiàn)在針對(duì)細(xì)胞死亡開發(fā)出了一種電轉(zhuǎn)保護(hù)劑，可以大大的降低細(xì)胞的死亡率,，同時(shí)提高電穿孔轉(zhuǎn)染效率,。

優(yōu)點(diǎn)：原理簡單,、不需要載體、不限制細(xì)胞類型和條件,，

缺點(diǎn)：需要特殊的設(shè)備,，對(duì)細(xì)胞傷害很大，細(xì)胞死亡率高,。

3,、病毒感染：

對(duì)于脂質(zhì)轉(zhuǎn)染于電穿孔轉(zhuǎn)染都無法成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞建議用病毒感染，此法可以快速100%感染,，檢測成功率高,。

優(yōu)點(diǎn)：高轉(zhuǎn)染效率，適用于較難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系,，可用于體內(nèi)轉(zhuǎn)染,。

缺點(diǎn)：技術(shù)難度高，構(gòu)建重組蛋白是費(fèi)時(shí),，存在生物安全問題,，基因插入大小受限。

4,、磷酸鈣共沉淀法：

該方法可重復(fù)性差,，而且磷酸鈣溶液對(duì)溫度，PH和緩沖鹽濃度的變化十分敏感,，對(duì)細(xì)胞尤其是原代細(xì)胞毒性較大,，也不能采用RPMI培養(yǎng)基，因?yàn)槠浜懈邼舛鹊牧姿猁},。

優(yōu)點(diǎn)：便宜且容易獲得,，轉(zhuǎn)染效率高，適用于生產(chǎn)是和穩(wěn)定的蛋白質(zhì),。

缺點(diǎn)：可重復(fù)性較差,，不適用于動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染，有細(xì)胞毒性,，尤其對(duì)原代細(xì)胞

組織培養(yǎng)試劑：

基礎(chǔ)培養(yǎng)基—目前所使用的各種市售培養(yǎng)基(如,，RPMI 1640和DMEM),。培養(yǎng)基的成分包括營養(yǎng)物質(zhì)(氨基酸，葡萄糖),，維生素,，無機(jī)鹽，和緩沖物質(zhì),。有些成分非常不穩(wěn)定,，因此如果不在使用時(shí)新鮮加入就可能會(huì)產(chǎn)生問題,。務(wù)必要使培養(yǎng)基避光保存。因?yàn)橐阎幸恍┙M分和緩沖物質(zhì),，如HEPES,，當(dāng)暴露于光照下就會(huì)分解產(chǎn)生細(xì)胞毒性物質(zhì)。另外,，血清,，添加劑，來自于培養(yǎng)箱內(nèi)的污染物,、化學(xué)物質(zhì),，或真菌/細(xì)胞的污染也都可能影響到細(xì)胞生理。

細(xì)胞生長狀態(tài)：

密切觀察細(xì)胞,，確保它們狀態(tài)良好,，貼壁細(xì)胞相比較懸浮細(xì)胞—在轉(zhuǎn)染效率方面貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞之間的差異顯著，天生趨于懸浮的細(xì)胞非常難以轉(zhuǎn)染,，相反,，天生為貼壁的細(xì)胞則可適應(yīng)懸浮生長的條件，

載體DNA：

載體的完整性是載體是否具有功能取決于他結(jié)構(gòu)的完整性,，轉(zhuǎn)染效率受到質(zhì)粒制備物的超螺旋結(jié)構(gòu)和舒展結(jié)構(gòu)之間比列,、涮螺旋終端、核酸酶的降解,，以及來自于儲(chǔ)存和處理過程中的物理壓力的影響,。