多抗和單抗的區(qū)別？

多抗是多個B細胞克隆產(chǎn)生的針對多種抗原表位的多種抗體混合物,，單抗是一個B細胞克隆產(chǎn)生的針對一種抗原表位的的單一抗體,。

多抗較單抗的優(yōu)勢是什么？

a.制備成本低廉,，制備所需技術(shù)要求不高,，制備周期短。

b. 能識別一個抗原上的多個表位,，可在IP等實驗中獲得更好的結(jié)果,。

c. 多抗因為靶蛋白可在多個表位上結(jié)合不止一個抗體分子，有助于放大低表達水平的靶蛋白信號,。

d. 能識別出與免疫原蛋白質(zhì)具有高同源性的蛋白質(zhì),，或者從非免疫原物種的組織樣品中篩選靶蛋白，例如當(dāng)未測試物種中的抗原性質(zhì)未知時,，有時會使用多克隆抗體,。e. 可識別多個結(jié)構(gòu)域，即使原始抗原的一些空間結(jié)構(gòu)或者序列發(fā)生小變化或者部分抗原決定簇變化,，仍可以識別抗原,，因此有更大的適應(yīng)性。

多抗較單抗的劣勢是什么,？

a.容易產(chǎn)生批次間的差異

b. 產(chǎn)生大量的非特異性抗體,，有時可能在某些應(yīng)用里產(chǎn)生背景信號,。

單抗如何選擇？

如果對抗體的特異性要求高,，用量較大或需要長期使用一致的抗體,，制備的抗體應(yīng)用要求多（WB/IP/IF/ICC等)，可以選擇制備單克隆抗體,。

多抗如何選擇,？

多抗相比較單抗仍然有制備時間短、制備成本低的特點,，在一些情況下也是一種選擇,。另外，在相同條件下,，使用多抗可以提高檢測的靈敏度,，對于豐度偏低的蛋白也更容易檢出。

WB, IHC, IP/ChIP類型抗體有什么區(qū)別?

WB:目前最常做的類型,，WB識別的蛋白是經(jīng)過加熱變性之后都變成線性結(jié)構(gòu)的蛋白,。

IHC:兔疫組化中需要進行固定一步, 固定是為了盡量讓細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)維持和原有的一致。這種化學(xué)物質(zhì)的固定使蛋白

質(zhì)變性凝固,，與天然狀態(tài)下的蛋白質(zhì)有了一定的區(qū)別,，但是又不同WB中加熱變性變成了線性的結(jié)構(gòu)。

IP/ChIP:這類實驗是用抗體去結(jié)合生理狀態(tài)下的蛋白質(zhì),，因此IP和ChIP的抗體最好使用純化的天然蛋白制作的抗體。

目的蛋白分子量為何與實際不符?

當(dāng)條帶所示的實際大小與理論有偏差時,，可能有以下原因?qū)е?蛋白發(fā)生如磷酸化,、糖基化等翻譯后修飾時條帶會上移，蛋白發(fā)生剪切(如前體)時條帶會下移,，蛋白存在不同的可變剪切體或亞型,，強相互作用大分子存在時變性不徹底。

多抗做WB檢測為何有雜帶?

a. 從純化方式來看：采用ProteinA/G純化的多抗摻雜有動物本身產(chǎn)生的對其自身抗原產(chǎn)生的抗體,，這些抗體在檢測中會識別樣本中的蛋白而出現(xiàn)雜帶,，可以采用抗原親和純化避免雜帶的產(chǎn)生。

b. 從蛋白修飾來看：天然蛋白存在復(fù)雜的翻譯后修飾,。這點可以通過信息學(xué)分析進行解釋,。

c．從蛋白翻譯后加工來看：翻譯后蛋白前體經(jīng)切割可能會使部分蛋白分子量偏小，而天然組織中同時存在蛋白前體和切割加工后的蛋白,，二者序列有相同部分,，可能會產(chǎn)生雜帶。這點需要通過查閱與目的蛋白相關(guān)文獻進行了解,。

d．從同源家族蛋白來看：當(dāng)目的蛋白有同源家族蛋白時,，蛋白異構(gòu)體的存在可能會使分子量偏離預(yù)測分子量,，因為天然樣本中由同一個mRNA不同的剪接方式進行翻譯形成的蛋白產(chǎn)物也會有相同的抗原表位，同時被抗體識別時會產(chǎn)生雜帶,。

e. 從蛋白聚集形式來看：蛋白多聚體的形成,，雖然還原條件可以抑制多聚體的形成，但是強烈的蛋白間相互作用在還原條件下也有可能不解聚導(dǎo)致條帶偏大,。

抗體做WB為何不識別內(nèi)源樣本,？

蛋白在天然樣本中的豐度太低，此時需要進行富集或者過表達再進行檢測,。b. 如果豐度不低,，單抗/多抗不識別內(nèi)源可能是該抗體識別的表位在天然蛋白中有修飾位點，此時需要對蛋白進行修飾位點的分析,。