PCR實驗室裝修_規(guī)劃設計

由于該檢測方法可以測出普通檢驗難以檢測出的病毒，并具有靈敏性高,、特異性高,、快捷,、對樣品要求低等優(yōu)點，因此被臨床醫(yī)生廣為認可,，已廣泛應用于醫(yī)院的臨床診斷和各防疫檢測部門的禽疫病診斷,。但是，這種實驗需要有能保證安全,、配置合理的實驗室和非常規(guī)范的操作為前提,。

臨床基因擴增檢驗實驗室設計的核心問題是如何避免污染。因此,，實驗室的平面布局,、空調通風系統(tǒng)設計、氣流控制等都是圍繞這個核心問題進行的,。下面就對這幾個方面分別進行說明,。

PCR實驗室平面布局

臨床基因擴增檢測實驗室原則上分為四個單獨的工作區(qū)域：試劑貯存和準備區(qū)、標本制備區(qū),、擴增反應混合物配置和擴增區(qū),、擴增產物分析區(qū)。為避免交叉污染,，進入各個工作區(qū)域必須嚴格遵循單一方向進行,，即只能從試劑貯存和準備區(qū)—標本制備區(qū)—擴增反應混合物配置和擴增區(qū)—擴增產物分析區(qū)。

實驗室空調通風系統(tǒng)設計及壓力控制

PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求,，但是為了避免各個實驗區(qū)域間交叉污染的可能性,，宜采用全送全排的氣流組織形式。同時,，要嚴格控制送、排風的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求,。

1.試劑貯存和準備區(qū)

該實驗區(qū)主要進行的操作為貯存試劑的制備,、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于標本制作的材料應直接運送至該區(qū),，不得經(jīng)過其他區(qū)域,。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內，并在本區(qū)內制備成所需的貯存試劑,。對與氣流壓力的控制,，本區(qū)并沒有嚴格的要求。

2.標本制備區(qū)

該區(qū)域主要進行的操作為臨床標本的保存,、核酸（RNA,、DNA）提取、儲存及其加入至擴增反應管和測定RNA時cDNA的合成,。

本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為正壓,，以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染,。另外，由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染,，所以應避免在本區(qū)內不必要的走動,。

3.擴增反應混合物配制和擴增區(qū)

該區(qū)域主要進行的操作為DNA或cDNA擴增。此外,，已制備的DNA模板和合成的cDNA（來自樣本制備區(qū)）的加入和主反應混合液（來自試劑貯存和制備區(qū)）制備成反應混合液等也可在本區(qū)內進行,。在巢式PCR測定中，通常在第_一輪擴增后必須打開反應管,，因此巢式擴增有較高的污染危險性,，第二次加樣必須在本區(qū)內進行。

本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓,，以避免氣溶膠在本區(qū)漏出,，為避免氣溶膠所致的污染，應盡量減少在本區(qū)內的不必要走動,。個別操作如加樣等應在超凈工作臺內進行,。

4.擴增產物分析區(qū)

該區(qū)域主要進行的操作為擴增片段的測定。如使用全自動封閉分析儀器檢測,，此區(qū)域可不設,。

本區(qū)是主要的擴增產物污染來源，因此對本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓,，以避免擴增產物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域,。

PCR實驗室設計的核心問題是如何避免污染。在實際工作中,，常見的有以下幾種污染類型：擴增產物的污染,；天然基因組DNA的污染；試劑的污染以及標本間的污染,。由于一旦發(fā)生污染,，實驗就必須停止，直到找到污染源為止,，而且實驗結果必須作廢,，需重新進行實驗。所以發(fā)生污染后再圍繞實驗室來尋找污染源不但耗時而且繁瑣,，浪費人力物力,。因此要避免污染，首先應是預防,，而不是排除,。

PCR實驗室裝修_規(guī)劃設計

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