那么問題來了,，核酸檢測中，應(yīng)該如何建設(shè)一個標(biāo)準(zhǔn)的PCR實驗室,？PCR實驗室如何設(shè)計規(guī)劃才堪稱專業(yè),？PCR實驗室管理又有哪些注意要點(diǎn)？

PCR實驗室裝修建設(shè)

標(biāo)準(zhǔn)的PCR 實驗室分為四個區(qū)域,，分別為：

n1.試劑配制區(qū),； 

n2.樣品處理區(qū)； 

n3.核酸擴(kuò)增區(qū),；

n4.產(chǎn)物分析區(qū),；

如使用全自動分析儀，區(qū)域可適當(dāng)合并,。

（進(jìn)入各工作區(qū)域必須嚴(yán)格按照單一方向進(jìn)行,，不同的工作區(qū)域使用不同的工作服，例如不同的顏色。工作人員離開各工作區(qū)域時,，不得將工作服帶出） 

【各區(qū)的功能分別為】

試劑準(zhǔn)備區(qū)：擴(kuò)增試劑的配制,、分裝和保存。     

樣品處理區(qū)：樣品登記,、分裝,；核酸提取、保存和加樣,。    

擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：擴(kuò)增產(chǎn)物的測定,、結(jié)果分析、登記及報告,。  

擴(kuò)增前區(qū)與擴(kuò)增后區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分開,，須使用不同的房間，兩區(qū)之間有一定的間隔,。  

使用商品化試劑盒可在樣品處理區(qū)進(jìn)行少量試劑配制,。     

在滿足下列操作和清潔處理要求的前提下樣品處理區(qū)和試劑準(zhǔn)備區(qū)可設(shè)在同一房間內(nèi)：    

在生物安全柜內(nèi)操作；每個實驗人員,、實驗組分別使用各自的試劑及耗材,；    

盛放污染材料的器皿密封并一次性使用；  用有效的方法對操作區(qū)域和共享器具在實驗前后進(jìn)行清潔及消毒,。

PCR實驗室裝修建設(shè)要點(diǎn)

1,、主體結(jié)構(gòu)： 

主體為彩鋼板、鋁合金型材,。室內(nèi)所有陰角,、陽角均采用鋁合金50內(nèi)圓角鋁，從而解決容易污染,、積塵,、不易清掃等問題。結(jié)構(gòu)牢固,，線條簡明,，美觀大方，密封性好,。

2,、標(biāo)準(zhǔn)的三區(qū)分隔和氣壓調(diào)節(jié)：

將PCR過程分成試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本制備和PCR擴(kuò)增檢測三個獨(dú)立的實驗區(qū),。整個區(qū)域有一個整體緩沖走廊,。每個獨(dú)立實驗區(qū)設(shè)置有緩沖區(qū)， 同時各區(qū)通過氣壓調(diào)節(jié),，使整個PCR實驗過程中試劑和標(biāo)本免受氣溶膠的污染并降低擴(kuò)增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染,。

可打開緩沖區(qū)Ⅰ,，緩沖區(qū)Ⅱ和 PCR 擴(kuò)增區(qū)的排風(fēng)扇往外排氣，在實驗區(qū)的外墻上和各扇門上都安裝有風(fēng)量可調(diào)的回風(fēng)口,，空氣通過回風(fēng)口向室內(nèi)換氣,。

3、 消毒：

在三個實驗區(qū)和三個緩沖區(qū)頂部以及傳送窗內(nèi)部安裝有紫外燈,，供消毒用,。

在試劑準(zhǔn)備區(qū)和標(biāo)本制備區(qū) 還設(shè)置移動紫外線燈，對實驗桌進(jìn)行局部消毒,。

4,、機(jī)械連鎖不銹鋼傳遞窗：

試劑和標(biāo)本通過機(jī)械連鎖不銹鋼（不建議使用電子連鎖方式）傳遞窗傳遞，保證試劑和標(biāo)本在傳遞過程中不受污染（人物分流） 

5,、 地面

地面建議使用PVC卷材地面或自流坪地面,，整體性好。便于進(jìn)行清掃,，耐腐蝕,。沒有條件的也可采用水磨石地面，或大塊的瓷磚（至少800mm×800mm）接縫需要小于2mm,。

6、照明

燈具要選用凈化燈具,，能達(dá)到便于清洗,、不積塵的特點(diǎn)。

在建設(shè)的過程中應(yīng)注意

●規(guī)范的安裝流程和全面的服務(wù)流程,。 

●嚴(yán)格按照規(guī)范科學(xué)設(shè)計的安裝流程,。

●安裝前需要確定以下安裝條件，如：電源電壓,，電源進(jìn)線位置,，電話網(wǎng)絡(luò)線進(jìn)線位置，進(jìn)水水壓,，小安裝空間,，地面平整度，通風(fēng)孔,、進(jìn)水管和下水管的位置等,，理想狀態(tài)的空間尺寸和通風(fēng)口尺寸。

PCR實驗室設(shè)計要點(diǎn)

PCR實驗室可以是分散形式,，也可以是組合形式,。完成一組PCR實驗，通常應(yīng)經(jīng)過試劑配制,、樣品處理,、核酸擴(kuò)增及產(chǎn)物分析四個實驗過程,，若實驗工藝需要，還應(yīng)增加樣品粉碎過程,。

一,、分散形式PCR實驗室

所謂分散形式PCR實驗室，是指完成上述實驗過程的實驗用房彼此相距較遠(yuǎn),，呈分散布置形式,。對于這種布置形式的PCR實驗室，由于各個實驗之間不易相互干擾,，因此無需特殊條件要求,。 

二、組合形式PCR實驗室

所謂組合形式PCR實驗室, 是指完成PCR四個實驗過程的實驗用房相鄰布置,，組成獨(dú)立實驗區(qū)域的形式,。對于組合形式PCR實驗室，由于各個實驗間集中布置,，容易造成相互干擾,，因此，對總體布局以及屏障系統(tǒng)具有一定的要求,。各室在入口處設(shè)緩沖間,，以減少室內(nèi)外空氣交換。

環(huán)揚(yáng)未來實驗室對PCR實驗室建設(shè)一些經(jīng)驗分享：

試劑配制室及樣品處理室宜呈微正壓,，以防外界含核酸氣溶膠的空氣進(jìn)入,，造成污染；

可以通過控制進(jìn)風(fēng)風(fēng)量大于排風(fēng)風(fēng)量達(dá)到正壓效果,。

核酸擴(kuò)增室及產(chǎn)物分析室應(yīng)呈微負(fù)壓,，以防含核酸的氣溶膠擴(kuò)散出去污染試劑與樣品，可以通過控制排風(fēng)風(fēng)量大于進(jìn)風(fēng)風(fēng)量達(dá)到負(fù)壓效果,。 

在理想情況下,，PCR實驗室緩沖間內(nèi)，可設(shè)置正壓,，使室內(nèi)空氣不流向室外,，室外空氣不流向室內(nèi)。 PCR實驗室進(jìn)風(fēng)由原有中央空調(diào)控制,，要求將中央空調(diào)風(fēng)口安裝到定點(diǎn),，且高度為地面鋪裝好后2600mm處。

如果使用熒光PCR儀,，擴(kuò)增室和產(chǎn)物分析室可以合并,。

若房間進(jìn)深允許，可設(shè)PCR內(nèi)部走廊,。需要指出的是在減少室內(nèi)外空氣交換方面,，緩沖間比走廊更有意義,。

各個區(qū)域之間應(yīng)具備單向的實驗工藝流、物流,、人流與氣流,，形成單向流程的保護(hù)屏障，避免實驗之間的相互干擾,，防止核酸氣溶膠對實驗過程造成污染產(chǎn)生假性結(jié)果,。

實驗室的墻體，包括頂棚,，應(yīng)結(jié)構(gòu)牢固,、氣密性好；所有陰角宜采用圓弧形線條過渡,；墻體內(nèi)壁光潔,、不吸附、耐腐蝕,、易清洗消毒,；地面材料應(yīng)滿足無縫隙、無滲漏,、光潔,、耐腐蝕的要求。

PCR實驗室主要設(shè)備

試劑準(zhǔn)備區(qū) 

儀器設(shè)備主要有冰箱,、超凈臺,、加樣器、混勻器,、天平和離心機(jī)等,，加樣器,、天平除了要外,，還應(yīng)有定期校準(zhǔn)。   試劑分裝應(yīng)在超凈臺中進(jìn)行  擴(kuò)增反應(yīng)混合液應(yīng)使用分子生物學(xué)級的,，試劑制備好后應(yīng)有質(zhì)檢：一是否有污染,、二是檢測試劑的擴(kuò)增效果。

標(biāo)本制備區(qū) 

儀器設(shè)備主要有生物安全柜,、加樣器,、離心機(jī)、溫育儀,、混勻器等  

擴(kuò)增區(qū) 

擴(kuò)增區(qū)的主要儀器是核酸擴(kuò)增儀,、超凈臺、微量加樣器,、離心機(jī),、可移動紫外燈,。擴(kuò)增儀需進(jìn)行校準(zhǔn)。并配備UPS電源,，以防止由于電壓的波動,，停電對擴(kuò)增效果的影響。

分析區(qū) 

本區(qū)所使用的儀器設(shè)備有酶標(biāo)儀,、洗板機(jī),、加樣器和水浴箱等 潔凈實驗區(qū)的緩沖間部分面積不能超過主實驗室的八分之一,這是有規(guī)定的。 

一些瑣碎的,、不可忽略的實驗室設(shè)計

1.實驗室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計及壓力控制 

PCR實驗室并沒有嚴(yán)格的凈化要求,，但是為避免各個實驗區(qū)域間交叉污染的可能性，宜采用全送全排的氣流組織形式,。同時,，要嚴(yán)格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求,。

2.污染的預(yù)防與控制  

PCR實驗室設(shè)計的核心問題是如何避免污染,。在實際工作中，常見的有以下幾種污染類型：擴(kuò)增產(chǎn)物的污染,；天然基因組DNA的污染,；試劑的污染以及標(biāo)本間的污染。由于一旦發(fā)生污染,，實驗就必須停止,，直到找到污染源為止，而且實驗結(jié)果必須作廢,，需重新進(jìn)行實驗,。所以發(fā)生污染后再圍繞實驗室來尋找污染源不但耗時而且繁瑣，浪費(fèi)人力物力,。因此要避免污染,，首先應(yīng)是預(yù)防，而不是排除,。

PCR實驗室*的嚴(yán)格管理

（1）嚴(yán)格控制進(jìn)出實驗室的人員,。與實驗無關(guān)的人員不得隨意進(jìn)出實驗室，有條件的情況下要設(shè)置獨(dú)立的通道和進(jìn)出整個實驗區(qū)的門,； 

（2）盡量減少在實驗區(qū)內(nèi)不必要的走動以減少交叉污染的可能性,。 

（3）擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)是主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來源，廢液不能在實驗室中傾倒,，必須經(jīng)消毒液浸泡消毒后在遠(yuǎn)離實驗室的地方棄掉,，用過的吸頭等一次性材料也應(yīng)經(jīng)消毒液浸泡消毒后統(tǒng)一處理，如焚燒等,； 

（4）擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可能會用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì),，應(yīng)特別注意實驗人員的安全防護(hù),。完備的實驗室配套設(shè)施是保證實驗工作的必要條件，應(yīng)根據(jù)各個實驗室實驗內(nèi)容的不同配備相應(yīng)的設(shè)備和儀器,，如超凈工作臺,、離心機(jī)、加樣器等,。