一,、PCR實驗室平面布局

PCR實驗室布局圖

PCR實驗室原則上分為四個單獨的工作區(qū)域：試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū),、擴增反應(yīng)混合物配置和擴增區(qū),、擴增產(chǎn)物分析區(qū)，為了避免交叉污染,，進入各個工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循單一方向進行,，即只能從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)，各實驗區(qū)之間的試劑及樣品傳遞應(yīng)通過傳遞窗進行,。

二,、實驗室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計及壓力控制

實驗室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)

PCR實驗室并沒有嚴(yán)格的凈化要求，但是為避免各個實驗區(qū)域間交叉污染的可能性,，適合用全送全排的氣流組織形式,。同時，要嚴(yán)格控制送,、排風(fēng)的比例以保證實驗區(qū)的壓力要求,。

二、1 實際貯存和準(zhǔn)備區(qū)

PCR實驗室主要進行的操作為貯存試劑的制備,、試劑的分裝盒主反應(yīng)混合液的制備,。試劑和用于樣品制作的材料應(yīng)直接運送到這個區(qū)，不得經(jīng)過其他區(qū)域,。試劑原料必須貯存在本區(qū)內(nèi),，并再本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。該區(qū)對與氣流壓力的控制沒有嚴(yán)格的要求,。

二,、2 標(biāo)本制備區(qū)

該區(qū)域主要進行的操作為樣本的保存、核酸（RNA,、DNA）提取,、貯存及其加入值擴增反應(yīng)管和測定DNA的合成。壓力梯度要求為：相對領(lǐng)巾區(qū)域為正壓,，以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染,，另外由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動,。

二,、3 擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)

該區(qū)域主要進行的操作為DNA擴增，此外,，已制備的DNA模板（來自樣本制備區(qū)）的加入和主反應(yīng)混合液（來自試劑貯存和制備區(qū)）制備成反應(yīng)混合液等也可以在本區(qū)內(nèi)進行,。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為負(fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出,。為避免氣溶膠所致的污染,，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的布必要走動，個別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺內(nèi)進行,。

二,、4 擴增產(chǎn)物分析區(qū)

該區(qū)域主要進行的操作為擴增片段的測定，本區(qū)是zui主要的擴增產(chǎn)物污染來源,，因此對本區(qū)的壓力梯度要求為相對鄰近區(qū)域為負(fù)壓,，以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至其他區(qū)域。

三,、污染的預(yù)防與控制

PCR實驗室設(shè)計的核心問題是如何避免污染,，在試劑工作中,，常見的有以下幾種污染類型：擴增產(chǎn)物的污染；天然基因組DNA的污染；試劑的污染以及標(biāo)本間的污染,。一旦發(fā)生污染，實驗就必須停止,，直到找到污染源為止,，而且實驗結(jié)果必須作廢,，需要重新進行實驗，所以發(fā)生污染后再圍繞實驗室來尋找污染源不但耗時而且繁瑣,，浪費人力物力,。因此要避免污染，首先應(yīng)該是預(yù)防,，而不是排除,。

三、1 工作區(qū)域的嚴(yán)格劃分

1,、各個實驗區(qū)域設(shè)置合理,；

2、各個實驗區(qū)域要有明顯的標(biāo)記（如醒目的門牌或不同顏色的地面等等）,，以避免各個不同實驗區(qū)域設(shè)備物品,、試劑等發(fā)生混淆。

三,、2 合理的系統(tǒng)設(shè)置

1,、合理的空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)置，盡量采用全送全排的空調(diào)系統(tǒng),；

2,、嚴(yán)格的氣流壓力控制，保證不同的實驗區(qū)內(nèi)不同的壓力要求,。

三,、3 規(guī)范的操作

1、擴增檢驗實驗室的技術(shù)人員必須進行上崗培訓(xùn),，經(jīng)培訓(xùn)合格后才能從事臨床基因擴增檢驗的工作,；

2、在實驗操作過程中,，操作者必須戴手套,，并經(jīng)常更換。此外,，操作中使用一次性帽子也是一個有效防止污染的措施,；

3、清潔工作及時,、正確,。實驗工作結(jié)束后，必須立即對本區(qū)進行清潔,。除了常規(guī)的消毒液體對表面進行擦拭消毒或紫外燈的消毒外,，對一些實驗設(shè)備還應(yīng)進行高壓消毒處理。

三,、4 嚴(yán)格的管理

1,、嚴(yán)格控制進出實驗室的人員,，與實驗無關(guān)的人員不得隨意進出實驗室，有條件的情況下要設(shè)置獨立的通道和進出整個實驗區(qū)的門,；

2,、盡量減少在實驗區(qū)內(nèi)不必要的走動以及減少交叉污染的可能；

3,、擴增產(chǎn)物分析區(qū)是zui主要的擴增產(chǎn)物污染來源，廢液不能再實驗室中傾倒,，必須經(jīng)消毒液浸泡消毒后在遠(yuǎn)離實驗室的地方棄掉,，用過的吸頭等一次性材料也應(yīng)該經(jīng)過消毒液浸泡后統(tǒng)一處理，如焚燒等,；

4,、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可能會用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)，應(yīng)特別注意實驗室人員的安全防護,；

三,、5 完善的實驗室配套設(shè)備

完備的實驗室設(shè)施是保證實驗工作的必要條件，應(yīng)根據(jù)各個實驗室實驗內(nèi)容的不同配備相應(yīng)的設(shè)備和儀器,，如超凈工作臺,，離心機。加樣器等等,。