NEST 801008 爬片 12孔 適用于細胞培養(yǎng)板 100個/包
商品名稱:爬片
商品貨號:801008
品牌:耐思 NEST
規(guī)格:100個/包
NEST 801008 爬片 12孔 適用于細胞培養(yǎng)板 100個/包
一,、爬片的準備
1.爬片可用一般的蓋玻片,,也可用爬片,;本公司*的爬片不防一試,,適合多種細胞的爬片。
2.應用蓋玻片,,可根據(jù)自己的需要剪裁成合適的大小,,以備置于6孔板、12孔板或24孔板,;裁剪時可用前護士輸液用于打開玻璃安瓶的小沙輪,,或者是口腔科的那種小沙輪,輕輕劃一下后,,稍用力一掰就分開了,。 如果接種大皿的話,我一般不將蓋玻片切開,直接清潔后放入培養(yǎng)皿中,,到染色時再將之切開,,這樣既保證了細胞均一性,又可同時做幾個指標的染色,。
3.將剪裁好的爬片,,置于濃硫酸中浸泡并guoye,第二天先用自來水沖洗20遍,,再置于無水酒清中浸泡6小時,,再用三蒸水沖洗3遍(個人認為主要目的是將酸沖洗干凈就可以了,如果不干凈的話,,細胞帖壁不好),,放在飯盒或者玻璃培養(yǎng)皿中烘干后進行高壓消毒。
4.高壓后取出放入烤箱中烤干,,備用,。烤干后可放入超凈臺中,。
5.關(guān)于多聚賴氨酸,,很多人都將玻片用此處理,以使細胞與玻片結(jié)合更牢,。但我在做爬片時從來沒用過多聚賴氨酸,,細胞貼壁仍然很好,且在做后續(xù)的免疫細胞化學染色,、TUNEL等凋亡檢測,、免疫熒光等也從未脫過片。
二,、細胞爬片
1.胰酶消化細胞后計數(shù)重懸細胞于*培養(yǎng)基中,。
2.加細胞時,根據(jù)玻片的大小,,先在每個孔里準備放爬片的位置滴少量培養(yǎng)基,,目的是使玻片與培養(yǎng)皿靠培養(yǎng)基的張力粘合到一起,然后放玻片,,防止加細胞懸液時玻片漂起,,造成雙層細胞貼片。整個過程注意無菌操作,。
3.根據(jù)自己的需要選擇合適的細胞密度種入培養(yǎng)板內(nèi)即可
4.待細胞貼壁后,,可去上清加含藥培養(yǎng)基。
5.按照實驗設計,,作用一定時間后取玻片,。取玻片時由于玻片與培養(yǎng)皿底結(jié)合較緊,,張力較大,我一般將注射器針頭針尖向背面弄個小鉤,,這樣將爬片輕輕勾起,,用小鑷子取出就可以了。如果要做諸如24h,,48h,,72h等這樣時間點的實驗的話,將所需數(shù)量的爬片取出時應用酒精燈火焰燒一下針頭和鑷子,。末取出的可接著繼續(xù)培養(yǎng),。
三、細胞爬片的固定
細胞爬片取出后,,一般用PBS洗2遍,,然后再做固定。當然,,根據(jù)研究目的,,PBS洗也不是一定要做的,比如做凋亡的TUNEL染色時就避免洗,,因為凋亡的細胞在洗的過程中有可能會脫落,。
另外在保存細胞爬片的時候,我一般用培養(yǎng)皿或板,,先在皿底放一層面巾紙,,然后再放爬片,這樣方便做實驗時取片,。然后蓋上蓋子,,并在蓋子上做標記,為避免混淆,,可用透明膠帶將蓋子和皿連在一起,。一般-20℃保存2-3個月的片子做免疫組化是沒有問題的。
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