NEST 801009 爬片 6孔 適用于細(xì)胞培養(yǎng)板 100個(gè)/包
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NEST 801009 爬片 6孔 適用于細(xì)胞培養(yǎng)板 100個(gè)/包
商品名稱:爬片
商品貨號(hào):801009
品牌:耐思 NEST
規(guī)格:100個(gè)/包
一、爬片的準(zhǔn)備
1.爬片可用一般的蓋玻片,,也可用爬片,;本公司*的爬片不防一試,適合多種細(xì)胞的爬片,。
2.應(yīng)用蓋玻片,,可根據(jù)自己的需要剪裁成合適的大小,以備置于6孔板、12孔板或24孔板,;裁剪時(shí)可用前護(hù)士輸液用于打開玻璃安瓶的小沙輪,,或者是口腔科的那種小沙輪,輕輕劃一下后,,稍用力一掰就分開了,。 如果接種大皿的話,我一般不將蓋玻片切開,,直接清潔后放入培養(yǎng)皿中,,到染色時(shí)再將之切開,這樣既保證了細(xì)胞均一性,,又可同時(shí)做幾個(gè)指標(biāo)的染色,。
3.將剪裁好的爬片,置于濃硫酸中浸泡并guoye,,第二天先用自來水沖洗20遍,,再置于無水酒清中浸泡6小時(shí),再用三蒸水沖洗3遍(個(gè)人認(rèn)為主要目的是將酸沖洗干凈就可以了,,如果不干凈的話,,細(xì)胞帖壁不好),放在飯盒或者玻璃培養(yǎng)皿中烘干后進(jìn)行高壓消毒,。
4.高壓后取出放入烤箱中烤干,,備用??靖珊罂煞湃氤瑑襞_(tái)中,。
5.關(guān)于多聚賴氨酸,很多人都將玻片用此處理,,以使細(xì)胞與玻片結(jié)合更牢,。但我在做爬片時(shí)從來沒用過多聚賴氨酸,細(xì)胞貼壁仍然很好,,且在做后續(xù)的免疫細(xì)胞化學(xué)染色,、TUNEL等凋亡檢測(cè)、免疫熒光等也從未脫過片,。
二,、細(xì)胞爬片
1.胰酶消化細(xì)胞后計(jì)數(shù)重懸細(xì)胞于*培養(yǎng)基中。
2.加細(xì)胞時(shí),,根據(jù)玻片的大小,,先在每個(gè)孔里準(zhǔn)備放爬片的位置滴少量培養(yǎng)基,目的是使玻片與培養(yǎng)皿靠培養(yǎng)基的張力粘合到一起,,然后放玻片,,防止加細(xì)胞懸液時(shí)玻片漂起,,造成雙層細(xì)胞貼片。整個(gè)過程注意無菌操作,。
3.根據(jù)自己的需要選擇合適的細(xì)胞密度種入培養(yǎng)板內(nèi)即可
4.待細(xì)胞貼壁后,,可去上清加含藥培養(yǎng)基。
5.按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),,作用一定時(shí)間后取玻片,。取玻片時(shí)由于玻片與培養(yǎng)皿底結(jié)合較緊,張力較大,,我一般將注射器針頭針尖向背面弄個(gè)小鉤,,這樣將爬片輕輕勾起,用小鑷子取出就可以了,。如果要做諸如24h,,48h,72h等這樣時(shí)間點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)的話,,將所需數(shù)量的爬片取出時(shí)應(yīng)用酒精燈火焰燒一下針頭和鑷子,。末取出的可接著繼續(xù)培養(yǎng)。
三,、細(xì)胞爬片的固定
細(xì)胞爬片取出后,,一般用PBS洗2遍,然后再做固定,。當(dāng)然,,根據(jù)研究目的,PBS洗也不是一定要做的,,比如做凋亡的TUNEL染色時(shí)就避免洗,,因?yàn)榈蛲龅募?xì)胞在洗的過程中有可能會(huì)脫落。
另外在保存細(xì)胞爬片的時(shí)候,,我一般用培養(yǎng)皿或板,,先在皿底放一層面巾紙,然后再放爬片,,這樣方便做實(shí)驗(yàn)時(shí)取片。然后蓋上蓋子,,并在蓋子上做標(biāo)記,,為避免混淆,可用透明膠帶將蓋子和皿連在一起,。一般-20℃保存2-3個(gè)月的片子做免疫組化是沒有問題的,。