NEST 801009 爬片 6孔 適用于細(xì)胞培養(yǎng)板 100個(gè)/包

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NEST 801009 爬片 6孔 適用于細(xì)胞培養(yǎng)板 100個(gè)/包

商品名稱：爬片

商品貨號(hào)：801009

品牌：耐思  NEST

規(guī)格：100個(gè)/包

一、爬片的準(zhǔn)備

        1.爬片可用一般的蓋玻片,，也可用爬片,；本公司*的爬片不防一試，適合多種細(xì)胞的爬片,。

        2.應(yīng)用蓋玻片,，可根據(jù)自己的需要剪裁成合適的大小，以備置于6孔板、12孔板或24孔板,；裁剪時(shí)可用前護(hù)士輸液用于打開玻璃安瓶的小沙輪,，或者是口腔科的那種小沙輪，輕輕劃一下后,，稍用力一掰就分開了,。 如果接種大皿的話，我一般不將蓋玻片切開,，直接清潔后放入培養(yǎng)皿中,，到染色時(shí)再將之切開，這樣既保證了細(xì)胞均一性,，又可同時(shí)做幾個(gè)指標(biāo)的染色,。

        3.將剪裁好的爬片，置于濃硫酸中浸泡并guoye,，第二天先用自來水沖洗20遍,，再置于無水酒清中浸泡6小時(shí)，再用三蒸水沖洗3遍（個(gè)人認(rèn)為主要目的是將酸沖洗干凈就可以了,，如果不干凈的話,，細(xì)胞帖壁不好），放在飯盒或者玻璃培養(yǎng)皿中烘干后進(jìn)行高壓消毒,。

        4.高壓后取出放入烤箱中烤干,，備用?？靖珊罂煞湃氤瑑襞_(tái)中,。

        5.關(guān)于多聚賴氨酸，很多人都將玻片用此處理,，以使細(xì)胞與玻片結(jié)合更牢,。但我在做爬片時(shí)從來沒用過多聚賴氨酸，細(xì)胞貼壁仍然很好,，且在做后續(xù)的免疫細(xì)胞化學(xué)染色,、TUNEL等凋亡檢測(cè)、免疫熒光等也從未脫過片,。

  二,、細(xì)胞爬片

        1.胰酶消化細(xì)胞后計(jì)數(shù)重懸細(xì)胞于*培養(yǎng)基中。

        2.加細(xì)胞時(shí),，根據(jù)玻片的大小,，先在每個(gè)孔里準(zhǔn)備放爬片的位置滴少量培養(yǎng)基，目的是使玻片與培養(yǎng)皿靠培養(yǎng)基的張力粘合到一起,，然后放玻片,，防止加細(xì)胞懸液時(shí)玻片漂起,，造成雙層細(xì)胞貼片。整個(gè)過程注意無菌操作,。

        3.根據(jù)自己的需要選擇合適的細(xì)胞密度種入培養(yǎng)板內(nèi)即可

        4.待細(xì)胞貼壁后,，可去上清加含藥培養(yǎng)基。

        5.按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),，作用一定時(shí)間后取玻片,。取玻片時(shí)由于玻片與培養(yǎng)皿底結(jié)合較緊，張力較大,，我一般將注射器針頭針尖向背面弄個(gè)小鉤,，這樣將爬片輕輕勾起，用小鑷子取出就可以了,。如果要做諸如24h,，48h，72h等這樣時(shí)間點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)的話,，將所需數(shù)量的爬片取出時(shí)應(yīng)用酒精燈火焰燒一下針頭和鑷子,。末取出的可接著繼續(xù)培養(yǎng)。

 三,、細(xì)胞爬片的固定

          細(xì)胞爬片取出后,，一般用PBS洗2遍，然后再做固定,。當(dāng)然,，根據(jù)研究目的，PBS洗也不是一定要做的,，比如做凋亡的TUNEL染色時(shí)就避免洗,，因?yàn)榈蛲龅募?xì)胞在洗的過程中有可能會(huì)脫落。

         另外在保存細(xì)胞爬片的時(shí)候,，我一般用培養(yǎng)皿或板,，先在皿底放一層面巾紙，然后再放爬片,，這樣方便做實(shí)驗(yàn)時(shí)取片。然后蓋上蓋子,，并在蓋子上做標(biāo)記,，為避免混淆，可用透明膠帶將蓋子和皿連在一起,。一般-20℃保存2-3個(gè)月的片子做免疫組化是沒有問題的,。