超凈工作臺在細胞培養(yǎng)實驗中的應用
植物(plant)組織具有無限增殖和產(chǎn)生不定芽,、不定根的能力。凈化工作臺的原理:潔凈環(huán)境是在特定的空間內(nèi),,潔凈空氣(進濾空氣)按設定的方向流動而形成的,。以氣流方向來分,現(xiàn)有的超凈工作臺可分為垂直式,,由內(nèi)向外式以及側向式,。在培養(yǎng)條件(tiáo jiàn)適宜時,只要通過一個超凈工作臺,,以及用一個芽可以培養(yǎng)出許多植株來,。其在保持優(yōu)良砧木及品種種性,、進行工廠化育苗方面具有很好的意義。
超凈工作臺在細胞培養(yǎng)實驗中的應用方法步驟(procedure)如下:
一,、外植體接種與材料(Material)消毒(disinfection)
取田間當年生新梢或一年生枝蔓,,去葉,用肥皂水將表面(appearance)刷洗,,并用自來水沖洗干凈,,剪成一芽一段,放入干凈燒杯,,拿進超凈工作(gōng zuò)臺,;先用70%酒精過一下,無菌(fungus)水(用高壓鍋,,在120℃下,,滅菌30分鐘的水)沖洗3遍;再用0.1%液消毒(disinfection)5~10分鐘,,無菌水沖洗3遍,;然后用酒精燈(Alcohol lamp)火焰消毒過的工具(鑷子、剪刀,、撥針,、解剖刀等)剝?nèi)[片、葉柄,,取出帶數(shù)個葉原基的幼芽接入培養(yǎng)基,,半包埋。
培養(yǎng)基配好后裝入廣口的罐頭瓶,、三角瓶或試管,,裝入量為1~2厘米高。凈化工作臺用途:廣泛適用于藥衛(wèi)生,、生物制藥,、食品、學科學實驗,、光學,、電子、無菌室實驗,、無菌微生物檢驗,、植物組培接種等需要局部潔凈無菌工作環(huán)境的科研和生產(chǎn)部門。也可連接成裝配生產(chǎn)線具有低噪聲,、可移動性等優(yōu)點,。120℃滅菌(Sterilization)(fungus)30分鐘后備用。
外植體接種后放到培養(yǎng)室的培養(yǎng)架上培養(yǎng)。培養(yǎng)條件(tiáo jiàn)為:光照1000勒克斯,,8~10個小時,,暗14~16小時;溫度(temperature)25~28℃,。培養(yǎng)1~2周,,即可看出是否消毒(disinfection)*,有無感染,。及時巡查,,將未感染的外植體轉接到新的培養(yǎng)瓶內(nèi),丟棄已感染的外植體,。
二,、繼代繁殖
上述接入的外植體培養(yǎng)1~2個月,即可長到2~3厘米長,。在超凈工作(gōng zuò)臺上,,將其剪成約1厘米長莖段,接種到新的培養(yǎng)基中(培養(yǎng)基的配方同上),。剪莖段時所用工具和培養(yǎng)皿(或牛皮紙)都要經(jīng)過消毒,,消毒方法分別同上述酒精(術語稱乙醇)燈消毒法和高壓消毒法。
其后,,大約每25天左右進行一次繼代培養(yǎng),。每次的莖段增殖量約為3~4倍。反復進行,,直到所需數(shù)量,。
三、生根
上述培養(yǎng)的莖段長到2厘米以上時,,即可用于生根,。生根培養(yǎng)基的成分為上述培養(yǎng)基的大量元素減半,除激素和蔗糖外,,其他成分不變,。
生根培養(yǎng)基配好后也需高壓滅菌(120℃,30分鐘)后使用,。
生根培養(yǎng)20天左右,,莖段上即可長出根,成為完整苗,。生根苗長到3~5厘米長時即可鍛煉,、移栽,。
四,、生根苗的鍛煉、移栽
(一)鍛煉
組培苗在人工培養(yǎng)條件(tiáo jiàn)下長期生長,,對自然生長環(huán)境(environment)的適應性減弱,。超凈工作臺是為了適應現(xiàn)代化工業(yè),、光電產(chǎn)業(yè)、生物制藥以及科研試驗等*域對局部工作區(qū)域潔凈度的需求而設計的,。移栽前需要一個過渡階段,,即鍛煉。鍛煉方法(method)為:將培養(yǎng)瓶移**自然光照下2~3天,,打開瓶口2~3天,,再移栽。
(二)移栽
移栽時先洗凈根上培養(yǎng)基,,避免(avoid)培養(yǎng)基感染雜菌(fungus)致苗死亡,。移栽方法及灌水、遮陽等管理同實生苗移栽,。但注意(attention)組培苗比較嬌嫩,,需輕盈操作。
五,、工廠化育苗
將上述培養(yǎng)基制備及超凈工作臺相關(related),、裝瓶、消毒(disinfection),、無菌(fungus)苗增殖,、生根、鍛煉,、移栽等過程全部放在實驗(experiment)室和溫室中進行,,即為工廠化育苗。目前,,這樣的生產(chǎn)線已在意大利和法G投入使用,。但外植體接種尚需人工操作。