Cellulose DE-52 DEAE 纖維素 DE-52
（1）DE52纖維素,。
（2）HCl；NaOH；0.01～0.05mol/L,，pH8.0 PB,；0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl,；0.5mol/L NaCl,。
（3）待純化標本：雜交瘤腹水或培養(yǎng)上清，免疫血清或飽和硫酸銨粗提品,。
（4）1.5×50cm 層析柱,；透析袋；紫外分光光度計及其他透析和層析所需的試劑和器材

Cellulose DE-52 DEAE 纖維素 DE-52

產(chǎn)品信息：  

    纖維素DE-52為中等堿性陰離子交換劑,，柱層析用于吸附劑,，用以分離提純多糖、肽,、核苷酸,、酶、血清組分和病毒等各種生物高分子,。

纖維素DE-52提取法純化多克隆抗體

該法提取IgG簡便,，既可小量提取，也可大量制備,。

1．批量提取法 稱取DEAE-纖維素(DE52)50g,，置于1000ml燒杯中，先以蒸餾水漂浮除去細顆粒,，再經(jīng)酸堿處理后,，用0.01～0.05mol/L，pH8.0左右的磷酸鹽緩沖液(PB)平衡,。將水分抽干,，或用布氏濾斗(內(nèi)放兩層濾紙)過濾，收集濕纖維素，以降低其離子強度,。按1ml血清加濕重5g DE52,，經(jīng)過充分攪拌，置4℃吸附1h,。上清液可再如此處理一次,，即獲得較純的IgG。該法提取IgG簡便,，既可小量提取,，也可大量制備。

2．Tris-Cl離子交換層析法(Ion-exchange chromatography)

【材料和試劑】

（1）DE52纖維素,。

（2）HCl,；NaOH；0.01～0.05mol/L,，pH8.0 PB,；0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl,；0.5mol/L NaCl,。

（3）待純化標本：雜交瘤腹水或培養(yǎng)上清，免疫血清或飽和硫酸銨粗提品,。

（4）1.5×50cm 層析柱,；透析袋；紫外分光光度計及其他透析和層析所需的試劑和器材,。

【操作步驟】   Cellulose DE-52 DEAE 纖維素 DE-52

（1）DE52纖維素的處理：DE52經(jīng)酸,、堿處理，0.01mol/L,，pH8.6 Tris-Cl平衡,。

（2）裝柱：將層析柱固定于滴定架上，柱底墊一圓形尼龍紗,，出口接一細塑料管并關(guān)閉出水,。將浸泡于0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl中的DE52沿玻璃棒倒入柱中,，待DE52自然沉降3～5cm高時,，吸除0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl,，或松開出水口螺旋夾,，控制流速1～2ml/min，同時連續(xù)加入DE52至所需高度,。待DE52*沉降后,，柱面放一圓形濾紙片,。

（3）平衡：松開出水口螺旋夾，以0.01mol/L,，pH8.6 Tris-Cl平衡,，控制流速為15滴/min，待流出液與洗脫液之pH值達到*時,，停止平衡,。

（4）待提取樣品的準備：將蛋白裝入透析袋里，置4℃冰箱,，對0.01mol/L pH8.6 Tris-Cl透析,。

（5）加樣、洗脫與收集：用吸管吸去柱面液體,，以毛細吸管沿柱壁加入樣品,，樣品體積相當(dāng)于柱床體積的1%～2%，蛋白濃度為50～70mg,。啟開出水口螺旋夾使樣品緩慢進入柱床內(nèi),，并用少量洗脫液清洗柱壁；待液體進入柱床后,，以0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl洗脫,，控制流速為14～16滴/min,。分部收集器收集，紫外監(jiān)測,，或人工收集,，以紫外分光光度計分別測定每管280nm OD值，描繪洗脫液峰,。

（6）濃縮：將洗脫液的280nm OD上峰段與下峰段各管分別合并,，裝入透析袋，以PEG濃縮至所需體積,。

Tris-PO4離子交換層析法

該法在上述方法的基礎(chǔ)上稍加改良,，即通過梯度洗脫，可用于血清中IgG和IgM的提取,。

【材料和試劑】     

（1）DE52纖維素,。

（2）待純化標本：雜交瘤腹水或培養(yǎng)上清，免疫血清或飽和硫酸銨粗提品,。

（3）1.5×50cm 層析柱,；透析袋及其他透析和層析所需的試劑和器材。

（4）梯度洗脫液包括：0.005 mol/L,，pH8.6 Tris-PO4,；0.055mol/L,，pH6.0 Tris-PO4；.5mol/L,，pH5.1 Tris-PO4,。

【操作步驟】

（1）蛋白標本對0.005mol/L，pH8.6 Tris-PO4透析,。

（2）DE52裝柱,，并以0.005mol/L，pH8.6 Tris-PO4平衡,。

（3）加樣,，以0.005mol/L，pH8.6 Tris-PO4洗脫,，紫外監(jiān)測直至洗脫液280nm OD回到基線,。這一步驟可除去血清中其他蛋白。

（4）以350ml 0.055mol/L,，pH6.0 Tris-PO4洗脫,，這一步驟可用于純化血清IgG和IgM。

（5）以125ml 0.055mol/L,，pH6.0 Tris-PO4和125ml 0.5mol/L,，pH5.1 Tris-PO4梯度洗脫，總量收集250ml,；重復(fù)步驟（5）,。

（6）根據(jù)280nm峰值合并蛋白峰，透析濃縮和保存同上,。

用過的DE52可用0.01mol/L,，pH8.6 Tris-Cl和0.5mol/L NaCl、0.01mol/L,，pH8.6 Tris-Cl梯度洗脫回收,。再用蒸餾水洗至中性，加入0.02%疊氮鈉于4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

性質(zhì)用途

性狀：干燥細結(jié)晶或纖維狀

基質(zhì) 高度交聯(lián)纖維素

配基 二乙基氨基乙基

配基密度 40μmol /ml

吸附載量 180mg HSA/ml

填料的顆粒大小 50μm

zui大流速 300cm/h

pH范圍 3-10,，在位清洗時pH范圍可到2-11

化學(xué)穩(wěn)定性 各種緩沖液及鹽,，0.5M NaOH及醋酸，8M脲,，6M鹽酸胍,，乙醇，異丙醇等

物理穩(wěn)定性 0.1M中性緩沖液中,，120℃30min

層析柱裝填

1. 吸附性層析一般建議裝填高度為 10~15cm 高,，分子篩建議裝填高度為60~90cm

1）組裝柱（如有需要連接裝柱器）。

2）取下下柱頭用裝柱緩沖液沖洗柱底適配器,，排除篩網(wǎng)下面的氣泡,，將下柱頭安裝

在層析柱底部,，旋緊調(diào)整旋鈕，并在層析柱底部保留 1cm 左右高度的液體,。

3）用裝柱緩沖液重懸介質(zhì),，制成 50%~75%左右的介質(zhì)懸浮液。

4）一次性將介質(zhì)倒入柱管中,，避免產(chǎn)生氣泡,。

5）如連接有裝柱器，立即往裝柱器中緩慢加入裝柱緩沖液,。將適配器或裝柱器上蓋

與層析系統(tǒng)相連接,。

6）設(shè)定所需流速⁺，打開柱下端,，啟動泵,，進行壓柱。

7）柱床穩(wěn)定后保持 30min 以上,，關(guān)閉泵和底閥

8）如連接有裝柱器,，移除裝柱器后連接適配器。

9）調(diào)節(jié)適配器,，使其固定在膠面上 0.5~1cm 處,，并保證適配器入口充滿液體。

10）打開底閥,，連接泵,，繼續(xù)用設(shè)定的流速（注意壓力不要超過 0.3Mpa）繼續(xù)壓柱

待膠面高度保持不變，標記此時膠面高度

11）暫停機器,，關(guān)閉底閥,，斷開柱頭入口,，調(diào)低適配器至膠面下 3~5mm 處,。封閉

上柱口，裝柱完成,。

 

蛋白層析柱/蛋白純化柱（一端柱床可調(diào),，螺紋型）
內(nèi)徑（mm）	耐壓（bar）	床層高度（mm）	床層體積（mL）	床層高度（mm）	貨號（玻璃）
10	5	100	0-7	0-100	LK10100
10		200	4月15日	55-200	LK10200
10		400	20-31	255-400	LK10400
10		600	35-47	455-600	LK10600
10		800	51-62	655-800	LK10800
10		1000	67-78	855-1000	LK101000
15	5	100	0-17	0-100	LK15100
15		200	9.7-35.3	55-200	LK15200
15		400	45-70	255-400	LK15400
15		600	80-106	455-600	LK15600
15		800	116-141	655-800	LK15800
15		1000	151-176	855-1000	LK151000
20	5	100	0-31	0-100	LK20100
20		200	17-63	55-200	LK20200
20		400	80-126	255-400	LK20400
20		600	143-188	455-600	LK20600
20		800	205-251	655-800	LK20800
20		1000	268-314	855-1000	LK201000
25	5	100	0-49	0-100	LK25100
25		200	27-98	55-200	LK25200
25		400	125-196	255-400	LK25400
25		600	223-294	455-600	LK25600
25		800	321-392	655-800	LK25800
25		1000	419-490	855-1000	LK251000
37	5	100	0-107	0-100	LK37100
37		200	59-214	55-200	LK37200
37		400	274-430	255-400	LK37400
37		600	488-644	455-600	LK37600
37		800	703-859	655-800	LK37800
37		1000	918-1074	855-1000	LK371000
50	5	100	0-196	0-100	LK50100
50		200	108-392	55-200	LK50200
50		400	500-785	255-400	LK50400
50		600	893-1177	455-600	LK50600
50		800	1285-1570	655-800	LK50800
50		1000	1678-1962	855-1000	LK501000