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分析型高效液相色譜儀的使用

  1.色譜柱它包括空柱和填料?？罩莾?nèi)壁拋光的不銹鋼管,，內(nèi)徑為4～5mm，長100～250mm,。按氣相色譜法中洗滌空柱的方法洗凈,，用勻漿法填充固定相。將此柱裝入儀器的管路中,，用柱式機(jī)械往復(fù)泵輸入新鮮脫氣的流動相,。等基線平直后可用苯、萘,、菲的混合試液,，用正己烷(含 0.05%甲醇)或甲醇：水(83：17)為流動相測定柱效及分離度塔板數(shù)在2～3萬/ml以上及分離度在1.5以上者，柱效好,。為防止柱污染,，常用1個 50mm長，4~5mm內(nèi)徑,，裝有硅膠(40-50mm)或立柱相同填料的保護(hù)柱(預(yù)柱)接在主柱之前,，以延長色譜柱的壽命。反相鍵合相柱用畢,。必須用水充分流經(jīng),，以洗去鹽類、酸堿等雜質(zhì)防止柱生銹及填料中雜質(zhì)的積聚,，再用甲醇流經(jīng)洗滌使色譜柱獲得再生,。

  2.流動相的洗脫方式配好經(jīng)脫氣的流動相放于貯液瓶中，經(jīng)過有濾過頭,、內(nèi)徑2mm的聚四氟乙烯管流入高壓泵進(jìn)入色譜柱,，zui后自檢測器流出或收集或作廢液回收,。用流動相洗脫的方式有恒溶劑脫洗法(isocratic dlution)，即自洗脫開始到結(jié)束,，溶劑的配比恒定,。另一類為梯度洗脫法(gradicnt clution),即使溶劑的極性強(qiáng)度在色譜過程中逐漸增加。須按一定程序不斷改變流動相的濃度配比,，從而使同一個試樣中組分性質(zhì)相差較小的及較大的都能在一次色譜過程中很好分離,，而整個色譜過程縮短。必須注意,，梯度洗脫法不能用于分子排阻色譜及用電化學(xué)檢測的反相高效液相色譜法中,。

  3.檢測器適用于血藥濃度的檢測器有紫外線吸收，熒光發(fā)射和電化學(xué)三種,。紫外檢測器應(yīng)用于對紫外光有吸收的藥物,，大多數(shù)藥物分子對紫外光有吸收，故能較普遍采用,，檢測限有0.1μg左右,。紫外檢測器有固定波長型、可變波長型及掃描器,，既能使流動相停流作組分的定性定量檢測,，又能提高測定靈敏度，重現(xiàn)性較好,。熒光發(fā)射檢測器對能產(chǎn)生熒光的藥物才能使用,。80年代應(yīng)用激光替代氙燈光源，光強(qiáng)度增加了3~4倍,，對某些藥物的檢測限可達(dá)pg級,。電化學(xué)檢測器是由一個碳糊或破碳做成的蒲層電解池。常用于檢測兒茶酚胺類及有酚類基團(tuán)的各種藥物和代謝物,。流出組分進(jìn)入2μl的薄層電解池，在一暄電壓下電解產(chǎn)生電流,，放大后檢測,，檢測限pg級。

分析型高效液相色譜儀