液相色譜儀是一種常用的色譜儀產(chǎn)品,,主要由儲液器,、進樣器、色譜柱,、檢測器,、記錄儀等幾部分組成,被廣泛用于多個領域中,。

液相色譜儀檢測的對象是高沸點,、難氣化的大分子化合物,其具有高效,、快速,、靈敏的特點,在生物醫(yī)藥研究,、檢測方面有較多的應用,。然而,在使用液相色譜儀檢測生物醫(yī)藥上的樣品時,,由于行業(yè)特性,,樣品中的蛋白質殘留,時常會對液相色譜柱造成污染,。
工作原理:
分配系數(shù)與組分,、流動相和固定相的熱力學性質有關,也與溫度,、壓力有關,。在不同的色譜分離機制中,K有不同的概念:吸附色譜法為吸附系數(shù),,離子交換色譜法為選擇性系數(shù)?。ɑ蚍Q交換系數(shù)),凝膠色譜法為滲透參數(shù),。但一般情況可用分配系數(shù)來表示。
在檢測生物物質如血漿或血清等積累在反相色譜柱上,必須采用不同與其他物質的清洗方法,。大部分情況下,,純有機溶劑如乙晴或甲醇不溶解多肽和蛋白質,因此不能有效地清洗柱子,。反而,,有機溶劑和緩沖液、酸,、離子對試劑等的混合物則能有效地溶解,。為確保液相色譜柱再生的效果,建議在使用溶劑沖洗色譜柱之前,,了解色譜柱的填料類型以及確保使用的溶劑能與柱子的填料相容,。硅膠基質的柱子通常來說都是相容的,但有機聚合物基質的柱子可能會在某些溶劑組合中膨脹或收縮,,這樣會影響色譜柱的柱效,。
在使用溶劑清洗反相色譜柱時,須對每個溶劑系統(tǒng)至少要沖洗20體積,。由于有些溶劑系統(tǒng)黏性很大,,沖洗的流速應該相應調整以確保不會超過泵壓。當檢測的是尿液等樣品溶液時,,至少應該用40~50體積的HPLC級水來沖洗柱子,。
液相色譜法只要求樣品能制成溶液,不受樣品揮發(fā)性的限制,,流動相可選擇的范圍寬,,固定相的種類繁多,因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的,、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質,。
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