液相色譜儀是一種常用的色譜儀產(chǎn)品,，主要由儲(chǔ)液器、進(jìn)樣器,、色譜柱,、檢測器、記錄儀等幾部分組成,，被廣泛用于多個(gè)領(lǐng)域中,。
液相色譜儀檢測的對(duì)象是高沸點(diǎn),、難氣化的大分子化合物，其具有高效,、快速,、靈敏的特點(diǎn)，在生物醫(yī)藥研究,、檢測方面有較多的應(yīng)用,。然而，在使用液相色譜儀檢測生物醫(yī)藥上的樣品時(shí),，由于行業(yè)特性,，樣品中的蛋白質(zhì)殘留，時(shí)常會(huì)對(duì)液相色譜柱造成污染,。
工作原理：
分配系數(shù)與組分、流動(dòng)相和固定相的熱力學(xué)性質(zhì)有關(guān),，也與溫度,、壓力有關(guān)。在不同的色譜分離機(jī)制中,，K有不同的概念：吸附色譜法為吸附系數(shù),，離子交換色譜法為選擇性系數(shù) （或稱交換系數(shù)）,，凝膠色譜法為滲透參數(shù),。但一般情況可用分配系數(shù)來表示。
在檢測生物物質(zhì)如血漿或血清等積累在反相色譜柱上,，必須采用不同與其他物質(zhì)的清洗方法,。大部分情況下，純有機(jī)溶劑如乙晴或甲醇不溶解多肽和蛋白質(zhì),，因此不能有效地清洗柱子,。反而，有機(jī)溶劑和緩沖液,、酸,、離子對(duì)試劑等的混合物則能有效地溶解。為確保液相色譜柱再生的效果,，建議在使用溶劑沖洗色譜柱之前,，了解色譜柱的填料類型以及確保使用的溶劑能與柱子的填料相容。硅膠基質(zhì)的柱子通常來說都是相容的,，但有機(jī)聚合物基質(zhì)的柱子可能會(huì)在某些溶劑組合中膨脹或收縮,，這樣會(huì)影響色譜柱的柱效。
在使用溶劑清洗反相色譜柱時(shí),，須對(duì)每個(gè)溶劑系統(tǒng)至少要沖洗20體積,。由于有些溶劑系統(tǒng)黏性很大,，沖洗的流速應(yīng)該相應(yīng)調(diào)整以確保不會(huì)超過泵壓。當(dāng)檢測的是尿液等樣品溶液時(shí),，至少應(yīng)該用40～50體積的HPLC級(jí)水來沖洗柱子,。
液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發(fā)性的限制,，流動(dòng)相可選擇的范圍寬,，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的,、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì),。
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