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脂質(zhì)異構(gòu)體成像新突破 | 島津OAD技術實現(xiàn)生物組織中脂質(zhì)C=C位置異構(gòu)體的精準可視化
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研究背景
脂質(zhì)在生物體內(nèi)扮演著至關重要的角色,許多疾病,如癌癥的發(fā)生和發(fā)展,與脂質(zhì)代謝密切相關,,脂質(zhì)空間成像在臨床醫(yī)學研究中也具有重要意義。脂質(zhì)種類繁多,、結(jié)構(gòu)復雜且異構(gòu)體豐富,,研究表明,不同類型的異構(gòu)體(例如不飽和脂質(zhì)中C=C雙鍵的位置異構(gòu)),,其生理功能也存在顯著差異,。
目前,脂質(zhì)精細結(jié)構(gòu)及異構(gòu)體的表征分析仍面臨挑戰(zhàn),。盡管已有多種質(zhì)譜技術被報道用于脂質(zhì)異構(gòu)體表征,,如臭氧誘導解離(OzID)、紫外光解離(UVPD),、電子誘導解離(EID)以及離子淌度等,,但在質(zhì)譜成像(MSI)分析中,對于區(qū)分脂質(zhì)異構(gòu)體方面仍存在局限性,,脂質(zhì)異構(gòu)體分布信息的缺失將影響相關代謝信息的準確性,。進行脂質(zhì)精細結(jié)構(gòu)解析和體內(nèi)可視化研究,對于探究脂質(zhì)生物標志物及疾病的發(fā)病機制等研究是十分重要且有意義的,。
本研究采用了一種新的策略,,將自由基誘導解離(OAD)(1-3)技術與質(zhì)譜成像相結(jié)合,成功實現(xiàn)生物組織中脂質(zhì)C=C位置異構(gòu)體的精準可視化,,為脂質(zhì)組學研究拓展了新的研究思路,。
OAD特色技術
島津創(chuàng)新開發(fā)的自由基誘導解離(OAD)技術有效克服了傳統(tǒng)碰撞誘導解離(CID)技術在區(qū)分C=C雙鍵位置方面的局限性,,為分子結(jié)構(gòu)解析提供更為詳盡的信息。如需了解更多關于OAD技術的信息,,請點擊wechat_redirect" _ style="color: rgb(70, 120, 134); font-size: 10.5pt; font-family: 等線;">往期推送。
解決方案
新一代島津成像質(zhì)譜顯微鏡iMScope QT可以配置自由基誘導解離源(OAD),,集成質(zhì)譜成像和自由基誘導解離的技術優(yōu)勢,,實現(xiàn)不飽和脂質(zhì)異構(gòu)體的原位可視化分析。本研究對小鼠小腦切片中的不飽和脂質(zhì)進行正/負離子模式下OAD-MS/MS分析,,揭示脂質(zhì)C=C位置異構(gòu)體的可視化及分布差異,,為理解和研究脂質(zhì)在生物體內(nèi)的結(jié)構(gòu)和功能提供重要參考。
實驗方法
◆ 樣本處理:取小鼠小腦切片,,用50 mM甲酸銨溶液(4)洗滌,,使用基質(zhì)升華儀iMLayer進行基質(zhì)涂覆(DHB,2,5-二羥基苯甲酸),,膜厚度1.2 μm,。
◆ 實驗儀器:島津成像質(zhì)譜顯微鏡iMScope QT
圖1 質(zhì)譜成像工作流程
實驗結(jié)果
正離子模式分析(以磷脂酰膽堿PC 34:1為例)
脂質(zhì)及其異構(gòu)體可視化及分布差異:磷脂酰膽堿PC 34:1由兩條脂肪酸鏈組成,總共含有34個碳原子和一個雙鍵,,具有抗炎,、神經(jīng)功能調(diào)節(jié)和代謝調(diào)節(jié)等功能。由于雙鍵的位置以及碳原子在兩條鏈中的分布不同,,PC 34:1存在多種同分異構(gòu)體,。研究表明,脂質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的差異可能會影響其物理性質(zhì)和生物學功能,,不同類型的同分異構(gòu)體在生物體的分布及含量情況如何呢,?
當我們使用傳統(tǒng)的質(zhì)譜成像技術對小鼠小腦中的PC 34:1進行原位成像分析時,通常只能獲得其整體分布圖像(圖2 (B)),,而無法識別其異構(gòu)體及其在生物體內(nèi)的具體分布,,這限制了對脂質(zhì)異構(gòu)體在生物體內(nèi)功能差異的理解。
然而,,通過使用新一代島津成像質(zhì)譜顯微鏡iMScope QT結(jié)合自由基誘導解離源(OAD),,可以利用OAD-MS/MS產(chǎn)生的特征碎片離子的不同,成功區(qū)分PC 34:1的兩種C=C雙鍵位置異構(gòu)體,,即PC 16:0_18:1(n-7)和PC 16:0_18:1(n-9),,并實現(xiàn)二者在腦組織中的分布可視化(圖2(C)和(D))。通過成像分析可以直觀地觀察到這兩種異構(gòu)體在生物體內(nèi)的分布存在明顯差異,,且PC 16:0_18:1(n-7) 的豐度遠低于 PC 16:0_18:1(n-9),。
圖2 正離子模式下PC 34:1及其雙鍵異構(gòu)體的OAD-MS/MS質(zhì)譜成像圖
(A) [PC 16:0_18:1+H]+ OAD-MS/MS譜圖;(B) [PC 16:0_18:1+H]+ 質(zhì)譜成像圖,;
(C) PC 16:0_18:1(n-9) 質(zhì)譜成像圖,;(D) PC 16:0_18:1(n-7) 質(zhì)譜成像圖
該技術彌補了傳統(tǒng)質(zhì)譜成像在脂質(zhì)異構(gòu)體成像方面的不足,,使得生物體內(nèi)脂質(zhì)異構(gòu)體的鑒定、原位可視化分析以及不同類型異構(gòu)體脂質(zhì)的相對定量成為可能,。對于進一步研究脂質(zhì)結(jié)構(gòu)的生物學意義,、加深理解脂質(zhì)代謝調(diào)控及其生理功能具有重要意義。
負離子模式分析(以硫苷脂Sulfatide 24:1為例)
硫苷脂C=C位置注釋: 在負離子模式下,,OAD技術同樣展現(xiàn)了其強大的分析能力,,成功注釋了硫苷脂/硫酸化己糖基神經(jīng)酰胺(SHexCer)的C=C位置,SHexCer d18:1/24:1的[M-H]-離子在m/z 888.623處有明顯的信號,,揭示了SHexCer d18:1 (?4) / 24:1 (n-9)的特征產(chǎn)物離子(m/z 750.480和m/z 792.493)(圖3 (A)),,并對該脂質(zhì)在鼠腦中的分布進行成像分析(圖3 (B))。
圖4 負離子模式下Sulfatide 24:1的OAD-MS/MS及質(zhì)譜成像圖
(A) [Sulfatide 24:1- H]- OAD-MS/MS譜圖,;(B) [Sulfatide 24:1- H]- 質(zhì)譜成像圖
總結(jié)
● 島津的創(chuàng)新離子碎裂技術,,精確識別脂質(zhì)異構(gòu)體的雙鍵位置,結(jié)合成像質(zhì)譜可實現(xiàn)組織中異構(gòu)體的可視化分析,;
● 適用于多種脂質(zhì)亞類的表征分析,,無論其電荷正負,均能提供優(yōu)異的分析效果,;
● 此外,,支持CID和OAD的雙重解離模式,同時獲取極性頭基團,、脂肪?;M成(CID)和C=C雙鍵位置信息(OAD),全面覆蓋化合物結(jié)構(gòu)信息,。
島津 OAD 技術和 iMScope QT 成像質(zhì)譜顯微鏡的結(jié)合,,為空間脂質(zhì)組學研究帶來了新的突破,開啟了脂質(zhì)異構(gòu)體精準可視化的新篇章,。我們期待這一技術在未來研究中發(fā)揮更大的作用,,以助力生物醫(yī)學研究的發(fā)展。
參考文獻:
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