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在生物體內(nèi)包含有各種功能的蛋白質(zhì)，這些蛋白質(zhì)經(jīng)過處理后成為成熟蛋白質(zhì)并被釋放到細(xì)胞外，它們在相互作用下可能會導(dǎo)致疾病,。為了了解這些疾病的病因、并在疾病的預(yù)防、診斷,、治療及藥物開發(fā)研究等方面取得進(jìn)展，鑒定微量樣品氨基酸序列的蛋白質(zhì)鑒定分析工作就變得越來越重要,。

蛋白質(zhì)N-端的序列組成對于蛋白質(zhì)整體的生物學(xué)功能有著巨大的影響力,。對蛋白N-端測序中常用Edman降解法，其基本原理包括三個主要的化學(xué)步驟：①異硫氰酸苯脂與蛋白質(zhì)和多肽的N-端殘基的偶聯(lián),、②苯氨基硫甲酰酞（PTC-肽）環(huán)化裂解,、③噻唑呤酮苯氨（ATZ）轉(zhuǎn)化為苯異硫尿氨基酸（PTH-氨基酸），每個循環(huán)從蛋白質(zhì)與多肽裂解出一個氨基酸殘基,，同時暴露出新的游離的氨基酸進(jìn)行下一個Edman降解,，最后通過轉(zhuǎn)移的PTH-氨基酸鑒定實現(xiàn)蛋白質(zhì)序列的測定。此原理設(shè)計出的自動分析儀進(jìn)行分析時,，能夠可靠地測定肽鏈的30個左右氨基酸殘基序列,，最多可以分析50-60個氨基酸殘基。

島津最新款蛋白測序儀PPSQ-51A/53A梯度系列以Edman降解法為基礎(chǔ),，將蛋白質(zhì)N-端順次切斷進(jìn)行序列分析,，產(chǎn)品具有靈敏度高、等度洗脫,、簡便數(shù)據(jù)處理（差減色譜圖）,、符合FDA 21 CFR part11規(guī)定、自動生成報告,、長序列分析等特點,，可以實現(xiàn)更靈敏、更可靠的蛋白質(zhì)N-端端氨基酸序列分析,，能夠滿足用戶對微量樣品氨基酸序列的蛋白質(zhì)鑒定分析的各種需求,。

【應(yīng)用案例】

PPSQ-51A/53A梯度系列在進(jìn)行微量蛋白分析中的應(yīng)用

★ Calmodulin的氨基酸序列分析

使用島津蛋白測序儀PPSQ-51A/53A梯度系列,，在下述的分析條件（表1）下對500 fmol的PTH-氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行分析與矯正，從結(jié)果（圖1）可以得出該產(chǎn)品滿足進(jìn)行微量PTH-氨基酸混合溶液的檢測要求,。

將Calmodulin（Merck cat#C4874）溶解于0.1%三氟乙酸水溶液中,，調(diào)制濃度為1 pmol/µL的樣品溶液。在經(jīng)過聚凝胺處理的玻璃纖維盤中添加2µL的樣品溶液,，進(jìn)行氨基酸序列分析,。

各循環(huán)色譜圖（圖2）所示，其中第1個循環(huán)的色譜圖作為原始色譜圖,，之后循環(huán)的色譜圖使用差減色譜圖表示,。所有的30個循環(huán)內(nèi)，我們都能夠檢測到PTH-氨基酸并鑒定氨基酸序列,，并且結(jié)果與理論序列一致,。

圖2 Calmodulin氨基酸序列分析的色譜圖

【結(jié)論】

島津最新款蛋白測序儀PPSQ-51A/53A梯度系列在蛋白質(zhì)的N末端部氨基酸序列分析中，即使是微量樣品情況下,，也可以完成氨基酸序列鑒定工作,。其在無數(shù)據(jù)庫支持情況下，也可完成微量樣品的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析,，是蛋白質(zhì)的氨基酸序列分析工作中的重要工具,。

①高靈敏度分析：高靈敏度的流通池可實現(xiàn)PTH氨基酸的高靈敏度檢測，從而達(dá)到微量樣品的序列分析,。

②分析穩(wěn)定性：該系統(tǒng)配備了高性能檢測器和溶劑輸送泵,，具有很高的分析穩(wěn)定性，即使在微流量范圍內(nèi),，也能提供出色的泵送性能,，進(jìn)而確保分析的高穩(wěn)定性。

③簡單方便的數(shù)據(jù)分析：使用蛋白質(zhì)測序儀的專用軟件可方便地進(jìn)行序列分析所需色譜圖的后期處理,、多個色譜圖的疊加以及氨基酸序列的自動推測,。

④符合FDA21 CFR Part 11規(guī)定：與LabSolutions DB/CS共同使用時符合FDA 21 CFR Part 11與PIC/S GMP指南中的要求

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