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近日,，中科院高能所李玉鋒研究員團(tuán)隊(duì),，以硒超富集植物-堇葉碎米薺（Cardamine violifolia）單粒種子為研究對(duì)象,，借助北京同步輻射裝置X射線熒光微分析實(shí)驗(yàn)站硬件和軟件功能升級(jí)契機(jī)，發(fā)展了基于同步輻射X射線熒光二維/三維成像技術(shù)（SRXRF）,、X射線吸收譜技術(shù),、二維質(zhì)譜成像技術(shù)（MALDI-MSI）及微區(qū)計(jì)算機(jī)斷層掃描（micro-CT）等技術(shù)的空間金屬組學(xué)（spatial metallomics）研究框架，實(shí)現(xiàn)了堇葉碎米薺單粒種子中有機(jī)硒和無機(jī)硒的原位二維/三維研究,，發(fā)現(xiàn)堇葉碎米薺種皮中存在甲基硒代化合物,，加深了對(duì)堇葉碎米薺富硒機(jī)制的理解，并以Spatial metallomics reveals preferable accumulation of methylated selenium in a single seed of the hyperaccumulator Cardamine violifolia為題發(fā)表于 Journal of Agricultural and Food Chemistry（影響因子/JCR分區(qū)：5.895/Q1）,。該研究工作得到島津中國創(chuàng)新中心的實(shí)驗(yàn)支持,。

圖1  Journal of Agricultural and Food Chemistry原文

背景介紹

硒(Se)是動(dòng)物和人類必需的元素。它是硒蛋白和硒酶的重要組成部分,，硒缺乏會(huì)增加各種神經(jīng),、內(nèi)分泌和癌癥風(fēng)險(xiǎn)，更嚴(yán)重的是,，會(huì)導(dǎo)致器官衰竭和死亡,。世界衛(wèi)生組織(WHO)和美國農(nóng)業(yè)部建議成人每日膳食硒攝入量為55 ~ 200 μg。然而,，在一些地區(qū)，人們的日攝入量明顯低于推薦劑量(僅26 μg/天),，因此,，探索富硒膳食補(bǔ)充劑來改善人們?nèi)粘Ｎ臄z入是很有必要的。

圖2  堇葉碎米薺

硒在植物生長周期內(nèi)無法被消耗,，一些百合科,、十字花科和豆科植物可累積高達(dá)幾千毫克/公斤的硒元素。原產(chǎn)于中國湖北省恩施市的堇葉碎米薺（Cardamine violifolia）已被證明是硒的超富集植物,，已用作膳食補(bǔ)硒劑原料,。

l                      單粒種子中硒的原位空間分布和形態(tài)分布

堇葉碎米薺對(duì)于硒元素的耐受性和超積累的機(jī)制主要包括:(1)鈣蛋白和富半胱氨酸激酶的表達(dá)下調(diào)和硒結(jié)合蛋白的表達(dá)上調(diào); (2)體內(nèi)解毒硒的泛素基因或蛋白的表達(dá);(3) 堇葉碎米薺硒的特定代謝途徑。研究發(fā)現(xiàn)堇葉碎米薺可以通過硫酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)體和各種S/Se代謝酶來積累硒元素,。而堇葉碎米薺中硒元素的主要存在形態(tài)為硒代半胱氨酸（SeCys）,，硒代蛋氨酸（SeMet），硒代羊毛硫氨酸,，甲基硒代半胱氨酸（MeSeCys）,，甲基硒代蛋氨酸（MeSeMet），二甲基硒醚（DMSe）和二甲基二硒醚（DMDSe）等,。

圖3  通過SRXRF和MALDI-MSI研究硒在單粒種子中的原位空間分布和形態(tài)

研究結(jié)果表明,，一方面SRXRF結(jié)果顯示硒元素在整個(gè)種子中都有分布，子葉中硒含量相對(duì)高于外胚層/種皮,；另一方面MALDI-MSI結(jié)果顯示DMSe (m/z 107.970),、MeSeCys (m/z 184.019)和MeSeMet (m/z 212.983)主要存在于種子外胚層,。硒植物毒性的一個(gè)突出原因被認(rèn)為是硒氨基酸(如SeCys)錯(cuò)摻入蛋白質(zhì)。已有研究表明,，甲基化SeCys形成MeSeCys是Se超富集物的一個(gè)關(guān)鍵耐受機(jī)制之一,， 這大大減少了非特異性取代蛋白質(zhì)中的Cys的SeCys的數(shù)量。本研究中MeSeCys的發(fā)現(xiàn)證實(shí)了這也是堇葉碎米薺的Se耐受的重要機(jī)制之一,。

質(zhì)譜成像MALDI-MSI方法

本研究中的質(zhì)譜成像部分使用島津iMScope QT (Shimadzu, Kyoto, Japan)進(jìn)行,。MALDI-MSI在光學(xué)顯微鏡的幫助下確定所需的采集區(qū)域，用激光二極管激發(fā)的摻釹釔鋁石榴石(Nd/YAG)激光(355 nm)照射種子組織切片,。激光直徑為40 μm,，掃描步長為80 μm。對(duì)每個(gè)像素進(jìn)行100次激光照射(1000 Hz重復(fù)頻率),。所有數(shù)據(jù)均在正負(fù)模式下分別采集,，采集范圍分別為m/z 100 ~ 500和m/z 500 ~ 1000。利用IMAGEREVEAL MS分析軟件對(duì)所采集的數(shù)據(jù)進(jìn)行圖像分析,，最終得到顯示多種形態(tài)硒的具體分布,。

圖4  島津新一代成像質(zhì)譜顯微鏡——iMScope QT

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