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島津二維液相色譜新應(yīng)用|流動(dòng)相含離子對(duì)試劑的化藥雜質(zhì)質(zhì)譜鑒定方法
離子對(duì)試劑：
極性藥物分析繞不開(kāi)的話題
液相色譜是藥物雜質(zhì)含量測(cè)定和有關(guān)物質(zhì)分離分析常用的技術(shù)手段,。對(duì)一個(gè)陌生的化合物，ODS反相色譜柱通常方法開(kāi)發(fā)條件會(huì)選擇酸性pH流動(dòng)相,。然而,，總有些化合物,，它們或含氨基、或含羧基,、磺酸基團(tuán),、磷酸基團(tuán)，極性較強(qiáng)在反相色譜柱上沒(méi)有保留,。打開(kāi)2020版《中國(guó)藥典》第二部,，不難發(fā)現(xiàn)這些品種，名稱中常含有“馬拉酸”、“鹽酸”,、“堿”,、“酸”等關(guān)鍵詞。對(duì)于這類(lèi)強(qiáng)極性化合物的分析,，藥典給出的答案是：流動(dòng)相中添加離子對(duì)試劑,。例如丁溴東莨菪堿、貝敏偽麻的有關(guān)物質(zhì)流動(dòng)相條件中含有十二烷基硫酸鈉,；馬來(lái)酸曲美布汀的流動(dòng)相含有戊烷磺酸鈉,；鹽酸頭孢吡肟的流動(dòng)相含有辛烷磺酸鈉；葉酸,、頭孢美唑和對(duì)氨基水楊酸鈉的流動(dòng)相含有四丁基氫氧化銨,。離子對(duì)試劑的添加，增強(qiáng)了極性化合物的保留,，改善了藥物與雜質(zhì)的分離,，是極性藥物分析的*。
離子對(duì)試劑：
“質(zhì)譜不能承受之重”
辛烷磺酸鈉和四丁基硫酸氫銨等常用離子對(duì)試劑,，屬于不揮發(fā)鹽類(lèi),，質(zhì)譜響應(yīng)強(qiáng)且信號(hào)經(jīng)久不衰，持續(xù)抑制目標(biāo)化合物的電離,。一旦誤操作進(jìn)入質(zhì)譜端,，需要清洗整個(gè)離子通路才能恢復(fù)質(zhì)譜的正常狀態(tài)。常規(guī)二維液相在線除鹽系統(tǒng)僅能去除無(wú)機(jī)鹽,，無(wú)法去除離子對(duì)試劑,。這是因?yàn)闊o(wú)機(jī)鹽（如磷酸鹽）在二維反相色譜柱上無(wú)保留，在死時(shí)間將其切至廢液從而實(shí)現(xiàn)在線除鹽,。然而離子對(duì)試劑具有較強(qiáng)的疏水性,，在常規(guī)ODS色譜柱上強(qiáng)烈吸附顯著拖尾，因此不能被常規(guī)二維液相系統(tǒng)去除,。
上圖是辛烷磺酸鈉在ESI離子源上的響應(yīng),。可生成簇離子,，質(zhì)譜響應(yīng)強(qiáng)且持久,，對(duì)ESI正負(fù)模式均可產(chǎn)生抑制。
上圖是四丁基硫酸氫銨在ESI離子源正模式的響應(yīng),，質(zhì)譜響應(yīng)強(qiáng)且持久,。四丁基硫酸氫銨與固定相強(qiáng)烈作用，色譜上呈現(xiàn)顯著拖尾,。
ReDual:一款可以同時(shí)分離無(wú)機(jī),、
有機(jī),、陰、陽(yáng)離子的“神柱”
ReDual系列色譜柱,，是島津公司最新推出的離子交換反相混合鍵合相色譜柱,，共分為三款：
ReDual™ SCX-C18 強(qiáng)陽(yáng)離子交換+反相
ReDual™ CX-C18 弱陽(yáng)離子交換+反相
ReDual™ AX-C18 強(qiáng)陰離子交換+反相
下圖是采用ReDual AX-C18 (4.6 mm I. D. × 150 mm L., 5 µm，貨號(hào)426-45415)分析磷酸二氫鈉,、四丁基硫酸氫銨和卡絡(luò)磺鈉混合樣品的色譜圖,。該款色譜柱表面鍵合叔胺基團(tuán)，在pH 2-7范圍內(nèi)色譜柱表面帶陽(yáng)離子,。除疏水作用外,，其對(duì)陰離子具有離子交換作用，對(duì)陽(yáng)離子具有離子排斥作用,。為分離極性類(lèi)似的陽(yáng)離子和陰離子型化合物提供了條件。下圖中四丁基氨根離子峰型對(duì)稱,，不拖尾無(wú)殘留,，可以通過(guò)閥切換導(dǎo)入廢液實(shí)現(xiàn)在線去除。
ReDual AX-C18色譜柱NQAD檢測(cè)器同時(shí)分離無(wú)機(jī)有機(jī)陰陽(yáng)離子（1：Na+;2：四丁基氨根離子,；3：H2PO3-;4：卡絡(luò)磺酸根離子）
應(yīng)用案例：
卡絡(luò)磺鈉參比制劑中雜質(zhì)結(jié)構(gòu)鑒定
本應(yīng)用采用常規(guī)中心切割二維液相系統(tǒng),，無(wú)需改造儀器；餾分轉(zhuǎn)移過(guò)程配有紫外檢測(cè)器監(jiān)控,，不存在檢測(cè)盲區(qū),；離子對(duì)試劑的去除未使用強(qiáng)酸或強(qiáng)堿性試劑；方法耐用性好,。一維使用C18反相色譜柱,，流動(dòng)相添加磷酸二氫鈉（含四丁基硫酸氫銨，pH 3.0）,；二維使用ReDual AX-C18色譜柱,，在線去除四丁基硫酸氫銨和磷酸二氫鈉，實(shí)現(xiàn)目標(biāo)化合物的質(zhì)譜鑒定,。
卡絡(luò)磺鈉雜質(zhì)2的質(zhì)譜鑒定結(jié)果
總結(jié)
島津中國(guó)創(chuàng)新中心搭載的特色中心切割二維色譜雜質(zhì)鑒定系統(tǒng),，二維使用島津公司最新推出的ReDual™ AX-C18強(qiáng)陰離子交換反相混合鍵合相色譜柱，成功實(shí)現(xiàn)一維流動(dòng)相中離子對(duì)試劑和無(wú)機(jī)鹽的在線去除,，并對(duì)卡絡(luò)磺鈉參比制劑中未知雜質(zhì)進(jìn)行了質(zhì)譜鑒定,。