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文獻(xiàn)解讀丨小鼠組織中口服奧曲肽的MALDI-TOF質(zhì)譜成像方法優(yōu)化及評(píng)價(jià)
本文由中國(guó)藥科大學(xué)天然藥物國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室藥物代謝與藥代動(dòng)力學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室所作，發(fā)表于Talanta 165 (2017) 128–135,。
近年來(lái),，基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時(shí)間質(zhì)譜成像（MALDI-TOF-MSI）技術(shù)受到了廣泛的關(guān)注，因?yàn)樗梢詫?duì)動(dòng)植物組織切片中不同的分子進(jìn)行定位,，盡管在逐點(diǎn)絕對(duì)定量中仍存在一些障礙,。奧曲肽是一種合成的生長(zhǎng)抑素類似物，在臨床上廣泛應(yīng)用于預(yù)防胃腸道出血,。
本研究的目的是建立一種定量顯示奧曲肽在小鼠組織中空間分布的MALDI-TOF-MSI方法。在這個(gè)過(guò)程中,，一個(gè)結(jié)構(gòu)相似的內(nèi)標(biāo)物與基質(zhì)溶液一起被點(diǎn)到組織切片上,，以盡量減少信號(hào)變化，并給出良好的定量結(jié)果,。通過(guò)比較奧曲肽與不同基質(zhì)共結(jié)晶后MALDI-TOF-MSI產(chǎn)生的信噪比,，選擇2,5-二羥基苯甲酸作為最合適的基質(zhì)。通過(guò)測(cè)定不同濃度的新鮮組織切片中奧曲肽的含量,，驗(yàn)證了MALDI-TOF-MSI在線性,、靈敏度和精密度方面的可靠性。驗(yàn)證的方法成功地應(yīng)用于奧曲肽在小鼠組織中的分布研究,。
結(jié)果表明,，MALDI-TOF-MSI不僅能清晰地顯示奧曲肽的空間分布，而且可以計(jì)算關(guān)鍵的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)（Tmax和t1/2）,。更重要的是,，MALDI-TOF-MSI測(cè)定的奧曲肽的組織濃度-時(shí)間曲線與LC-MS/MS測(cè)定的結(jié)果一致。這些發(fā)現(xiàn)說(shuō)明了MALDI-TOF-MSI在藥物開(kāi)發(fā)過(guò)程中的藥代動(dòng)力學(xué)分析潛力,。
使用儀器：島津MALDI TOF,、 LC–MS/MS
圖1 內(nèi)標(biāo)對(duì)MALDI-TOF-MSI分析小鼠肝切片中奧曲肽線性的影響。(A) 小鼠肝臟切片上的蘭瑞肽(內(nèi)標(biāo))的質(zhì)譜圖,，(B)加入奧曲肽標(biāo)準(zhǔn)溶液的肝臟切片光學(xué)圖像,，(C)5個(gè)濃度水平的奧曲肽的代表性質(zhì)譜圖像([M+H]+離子;m/z 1019 Da)，(D) 用奧曲肽的平均信號(hào)強(qiáng)度繪制的奧曲肽校準(zhǔn)曲線(n=5),，(E)經(jīng)內(nèi)標(biāo)校正后的奧曲肽的代表性質(zhì)譜圖像,，(F) 用奧曲肽/內(nèi)標(biāo)的平均強(qiáng)度比繪制的奧曲肽校準(zhǔn)曲線(n=5)
圖2 對(duì)口服20 mg/kg奧曲肽后0、10,、30,、60、90和120 min采集的小鼠組織進(jìn)行成像MS分析,。(A)胃切片的代表性光學(xué)和質(zhì)譜圖像,，(B)腸切片的代表性光學(xué)和質(zhì)譜圖像,，(C)肝切片的代表性光學(xué)和質(zhì)譜圖像
圖3 MALDI-TOF-MSI和LC-MS/MS測(cè)定奧曲肽的組織濃度-時(shí)間曲線。(A) MALDI-TOF-MSI法測(cè)定小鼠胃中奧曲肽的濃度-時(shí)間曲線;(B) LC-MS /MS法測(cè)定小鼠胃中奧曲肽的濃度-時(shí)間曲線;(C) LC-MS/MS法和MALDI-TOF-MSI法測(cè)定小鼠胃中奧曲肽的含量的相關(guān)性分析,。
本研究開(kāi)發(fā)了一種基于MALDI-TOF-MSI的小鼠組織切片奧曲肽定量分析方法,。首次通過(guò)比較DHB、CHCA和SA提取的奧曲肽在一系列激光功率水平下的信噪比,，系統(tǒng)研究了激光能量對(duì)MALDI基質(zhì)選擇的影響,。結(jié)果表明，DHB,、CHCA和SA的*功率水平應(yīng)分別設(shè)置為50,、70和60，DHB因其較高的靈敏度和較低的基質(zhì)效應(yīng)最終被選為最合適的MALDI基質(zhì),。蘭瑞肽是一種與奧曲肽結(jié)構(gòu)相似的生長(zhǎng)抑素類似物,，被用作內(nèi)標(biāo)，通過(guò)減小組織異質(zhì)性,、基質(zhì)晶體異質(zhì)性和激光功率波動(dòng)引起的離子信號(hào)變化,，提高分析的線性、準(zhǔn)確性和精密度,。然后成功地應(yīng)用所開(kāi)發(fā)的MALDI-TOF-MSI方法,，觀察口服20 mg/kg劑量后，奧曲肽在小鼠胃,、腸,、肝中的分布和消除過(guò)程。
結(jié)果表明,，MALDI-TOF MSI不僅能清晰地顯示奧曲肽在小鼠組織中的空間分布,，而且使關(guān)鍵藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)(Tmax和t1/2)的計(jì)算成為可能。更重要的是,，MALDI-TOF-MSI測(cè)定的奧曲肽的組織濃度-時(shí)間曲線與LC-MS/MS絕對(duì)定量的結(jié)果吻合較好,。
文獻(xiàn)題目
《Optimization and evaluation of MALDI TOF mass spectrometric imaging for quantification of orally dosed octreotide in mouse tissues》
使用儀器
島津MALDI TOF、 LC–MS/MS
作者
Tai Rao, Boyu Shen,，Zhangpei Zhu, Yuhao Shao, Dian Kang, Xinuo Li, Xiaoxi Yin, Haofeng Li,Lin Xie, Guangji Wang, Yan Liang
Key Lab of Drug Metabolism & hamacokinets,State Key Laboratory of Natural Medicines,China Pharmaceutical University, Tongjiaxiang 24, Nanjing 210009 PR China