使用iMScope TRIO 進行的毒性評價研究

-胺碘酮給藥后大鼠肺臟局部分析-

在藥物研發(fā)過程中,，候選化合物的藥代動力學分析不僅能闡明藥效藥理學機制,，從毒性評價的觀點出發(fā)也能帶來重要的信息,。一般情況下，會采用放射自顯影（Autoradiography: ARG）和熒光染料的方法,，但ARG的費用十分昂貴,，若將熒光劑作為標記試劑使用又可能會對藥代動力學造成影響。于是,，近年來,，作為非標記檢測候選化合物局部信息的方法，MS成像的分析技術備受矚目,。本方法不僅能在不進行標記的情況下進行各種物質的成像分析,，還能在同一切片上同時進行原藥和代謝物的檢測，為新藥研發(fā)帶來突破,。

在此,，為比較胺碘酮（圖1）給藥后，大鼠肺組織中觀察到的病理現(xiàn)象和胺碘酮的分布情況,，使用成像質譜顯微鏡iMScope TRIO（圖2）進行MS成像分析,。

——R. Yamaguchi, T.Yamamoto

圖1 胺碘酮的結構式

圖2 iMScope TRIO

胺碘酮給藥后的大鼠肺臟局部分析

本實驗中，對大鼠給予抗心律失常藥物胺碘酮并對其肺組織進行分析,。大量攝取胺碘酮后會引發(fā)磷脂質病,，能觀察到細胞的泡沫狀巨噬細胞浸潤等現(xiàn)象。但至今為止并沒有關于胺碘酮是否會在病變部位蓄積的信息,，因此在本實驗中采用MS成像的方法確認了病理現(xiàn)象與胺碘酮之間的關系,。使用胺碘酮標準品進行預實驗，選擇基質并對測量模式進行優(yōu)化,。樣本制作及組織切片MS成像分析的實驗條件如表1所示,。

表1 實驗條件

使用成像質譜顯微鏡iMScope TRIO，進行空間分辨率為5 μm的高分辨率成像,，將所得組織切片上的質譜圖與標準品的質譜圖進行比較后,，發(fā)現(xiàn)兩者均檢測得到m/z 646.0的信號（圖3）。選擇m/z 646.0成像,，確認在細胞的泡沫狀巨噬細胞浸潤的部位有胺碘酮積蓄（圖4）,。

圖3 組織切片和胺碘酮標準品的質譜圖

圖4 連續(xù)切片的HE 染色圖像和分析使用的光學圖像和MS成像

胺碘酮代謝產物的局部分析

有報告指出，給藥后,，胺碘酮會在大鼠體內發(fā)生N-脫乙基代謝,。本實驗觀測到與胺碘酮原型藥物相比小28 Da的m/z 618.0離子（圖5）。m/z 618.0的MS圖像如圖6所示,，與胺碘酮的局部分布相同,。據(jù)此,，可認為m/z 618.0的化合物有很大可能是胺碘酮的N-脫乙基化代謝物。

圖5 組織切片的質譜圖（m/z 600-700放大）

圖6 MS圖像（與代謝物的分子量相當）

MS圖像與HE染色圖像*一致的可能性

由于無法對HE染色后的切片進行MS成像分析,，需要對與HE染色切片連續(xù)的未染色切片進行MS成像分析,。但是，即使是連續(xù)切片,，組織形態(tài)相似也不等于*一致,，有必要依靠特征性的標記進行定位。如今,，為解決該問題,，按照如圖7所示的流程，用有機溶劑從經MS成像分析的切片中除去基質,，然后進行HE染色,，由此研究確保了相同切片的HE染色圖像與MS圖像的位置信息*一致。

圖7 MS成像分析后組織切片HE染色流程

致謝

在獲取本應用文集相關數(shù)據(jù)以及原稿編寫過程中,，田邊三菱制藥株式會社藥代動力學研究所的鍛治秀文老師,、以及橋本博幸老師給予了我們莫大幫助，在此我們致以最誠摯的謝意,。

文獻題目

《使用iMScope TRIO 進行的毒性評價研究-胺碘酮給藥后大鼠肺臟局部分析-》

使用儀器

島津iMScope TRIO

作者

R. Yamaguchi, T.Yamamoto

聲明

1,、本文不提供文獻原文。

2,、所引用文獻僅供讀者研究和學習參考,，不得用于其他營利性活動。