你的羊絨衫是真的嗎？動物毛發(fā)種類鑒定MALDI-TOF法辨真假,！

時間：2020-12-18 閱讀：465

2018年9月,，使用MALDI-TOF，通過檢測動物種類特異性多肽的動物毛發(fā)鑒定法作為標準（ISO）在日本發(fā)行,。另外,，它還將被確定為日本工業(yè)標準（JIS）。即使僅用1根毛發(fā),，也可采用該鑒別法進行分析,。因此不僅可以防止山羊絨的假冒，還可以用于進行羽毛,、人的頭發(fā)等各種毛發(fā)的鑒別以及食品混入異物檢查,。該方法由金澤工業(yè)大學基因組生物工學研究所基于島津MALDI-TOF系統(tǒng)開發(fā)。

動物毛發(fā)鑒別分析技術在各個領域都起著重要作用,。動物毛發(fā)被用于制作外套,、上衣,、毛衣等各種纖維制品。制作這樣的纖維制品時,，有義務根據(jù)家庭用品品質標識法對纖維的種類,、使用多種纖維時的混用率進行標識。另外,，毛發(fā)混入食品中時,，確定毛發(fā)種類對明確混入途徑至關重要。

除去水分,，90%左右的毛發(fā)由蛋白質組成,。圖1顯示的是動物毛發(fā)的構造。

圖 1 動物毛發(fā)的模式圖

毛發(fā)在防止外部沖擊的同時,，還起到了保溫的作用,，這一功能和毛發(fā)的構造有著密切的關系。毛發(fā)的蛋白質中含有大量的類固醇,，通過類固醇結合,，在分子間形成了多個交聯(lián)結構。毛發(fā)的化學分析需要進行溶解,，使用名為還原劑的物質來切斷二硫鍵,。另外,，所得到的蛋白質提取液中含有多種蛋白質和鹽類等物質,，因此，需要通過聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）等進行純化,。動物毛發(fā)纖維MALDI-TOF鑒定流程如圖2所示：

圖2 MALDI-TOF MS 的獸毛分析法

經過胰蛋白酶處理的多肽MALDI-TOF MS分析,，用MALDI-TOF MS檢測金屬靶板上的結晶樣品。調整激光功率等的檢測條件,，確保在觀察動物種類特異性峰值的m/z2450-2750領域能得到良好的分辨率,。

通過對SDS-PAGE蛋白條帶進行胰蛋白酶解后的樣品，進行MALDI-TOF MS檢測,。找到不同動物種類的特異性峰值代表,。

(a) Band1 KeratinⅡ (b) Band2 KeratinⅠ

圖 3 MALDI-TOF MS 檢測圖譜

通過MALDI-TOF MS技術找到山羊絨、羊毛,、牦牛毛三者之間的差異峰值區(qū)間m/z 2450-2750和特異峰值,。如圖4所示。

圖 4 MALDI-TOF MS 中的動物物種類特異性峰值

表1 動物種類特異肽的氨基酸序列＊1

*1 涂黑的峰值為主峰

對這些動物種類特異性峰值進行MS/MS分析,，推測氨基酸排列的結果如表1所示2）,。由23個氨基酸組成的肽，山羊絨和羊毛之間有1個,，山羊絨和牦牛毛之間有4個氨基酸不同,。

很多纖維制品在加工工序中會進行漂白,、脫色、染色等化學處理,，但動物毛發(fā)特殊的峰值位置不會因為這些處理而改變,，因此明確其可用于識別纖維制品中的動物毛發(fā)種類。

1根毛發(fā)的分析

分析纖維制品中的動物毛發(fā)時,，為了避免產品成分出現(xiàn)偏差,，好對產品進行大范圍采樣并進行平均化，然后使用其中的一部分,。因此,，很少需要微量分析。另一方面,，在分析食品中混入的毛發(fā)時,，建議盡可能采用少量試樣進行分析。

在科學調查中,，通過毛發(fā)的DNA分析可以得到很多與血型等能夠確定個人特征相關的信息,。但是，纖維制品中所使用的動物毛發(fā)大多只有毛干部分,，特別是被濃重染色的產品,，很難進行DNA分析。采用MALDI-TOF MS法分析蛋白質,，即使是1根毛發(fā)也可以充分進行檢測,。

根據(jù)動物種類的不同，特異性的峰值位置也各不相同,，但是同一屬性的動物在同一個位置出現(xiàn)峰值的情況比較多,。山羊絨和安哥拉山羊毛等需要用顯微鏡識別。表2表示主要動物特異性峰值的峰值位置（m/z）以及從數(shù)據(jù)庫推定的氨基酸排列,。貍貓,、狐貍、狗的主峰位置是一樣的,，但可以看到狐貍的第二峰值是2638,，狗是2641，由此能夠對它們做出判斷,。除了此處所示的動物以外,，能夠利用基因組數(shù)據(jù)庫的動物也可推測并確認特異性峰值的位置。這樣,，只看m/z2450-2750的光譜就可確定所含動物毛發(fā)的種類,，這就是MALDI-TOF MS法的一大特征。