引  言

隨著檢測技術(shù)的不斷發(fā)展,，特別是質(zhì)譜儀的普及,，對于復(fù)雜樣品中微量成分的檢測，已經(jīng)變得更加容易,。但為了實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確定量,，仍需將微量或者痕量的目標(biāo)成分與復(fù)雜基質(zhì)進(jìn)行分離，以減少干擾,。這樣,，原本簡單快速的分析過程，卻因?yàn)榉爆嵉那疤幚聿僮鞫兊玫托?，費(fèi)時(shí),。更重要的是，前處理步驟越多,，人為因素干擾就越多,，分析結(jié)果重現(xiàn)性和準(zhǔn)確度將無法保證,。因此,，為節(jié)省人力，并得到更加準(zhǔn)確的分析結(jié)果,，對自動(dòng)化前處理裝置的需求越來越多,，各大儀器廠商也紛紛推出了此類產(chǎn)品,，但由于價(jià)格昂貴，短時(shí)間內(nèi)仍無法得到普及,。

島津中國創(chuàng)新中心一直致力于開發(fā)和引進(jìn)全新的分析檢測技術(shù),，幫助用戶解決實(shí)際工作中的難題。此次,，將為大家介紹復(fù)雜樣品自動(dòng)化分析中的在線前處理系列技術(shù),。在現(xiàn)有分析設(shè)備基礎(chǔ)上，通過追加高壓切換閥,，應(yīng)用超臨界流體色譜技術(shù),，配備特殊填料柱，搭建多維柱切換系統(tǒng),，來實(shí)現(xiàn)含有復(fù)雜基質(zhì)的生物樣品以及食品藥品的在線前處理,，并實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確快速的自動(dòng)化分析。

今天,，我們首先為大家介紹通過使用二維柱切換系統(tǒng)和穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)實(shí)現(xiàn)全血中免疫抑制劑的快速監(jiān)測技術(shù),。

免疫抑制劑是對機(jī)體的免疫反應(yīng)具有抑制作用的一類藥物，主要用于器官移植抗排斥反應(yīng)和自身免疫疾病的治療,。在臨床上,，免疫抑制劑的濃度必須維持在一個(gè)有效和安全的范圍內(nèi)，才能起到對治療的促進(jìn)作用,。常用的免疫抑制劑如環(huán)孢素A（Cyclosporin A）,、依維莫司（Everolimus）、西羅莫司（Sirolimus）和他克莫司（Tacrolimus）等,，由于其治療窗窄（治療濃度與中毒濃度接近）,，并且其代謝過程容易受個(gè)體差異，環(huán)境等因素影響,，因此對該類免疫抑制劑藥物濃度進(jìn)行監(jiān)測,，對于患者的治療具有非常重要的指導(dǎo)意義。

圖1. 四種常用免疫抑制劑結(jié)構(gòu)式（依維莫司Everolimus,、他克莫司Tacrolimus,、環(huán)孢素A Cyclosporin A、西羅莫司Sirolimus）

目前,，用于生物樣品中免疫抑制劑的定量方法主要有免疫分析法,、高效液相色譜法（HPLC）和LC-MS/MS法等，現(xiàn)有方法存在專屬性差或者前處理復(fù)雜等缺點(diǎn),。為簡化樣品前處理過程,，提高分析效率，并提高檢測結(jié)果準(zhǔn)確性,，島津公司開發(fā)了一套二維色譜質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng),，并配合穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)技術(shù),，實(shí)現(xiàn)了全血樣品中的免疫抑制劑的快速監(jiān)測。如下圖所示,，首先在第一維流路中,，使用特殊的SPE小柱對全血樣品中的免疫抑制劑進(jìn)行在線捕集，并除去樣品溶液當(dāng)中的蛋白和鹽,。進(jìn)一步,，在第二維流路當(dāng)中，分析流動(dòng)相將免疫抑制劑從捕集小柱上洗脫至分析柱上進(jìn)行分離,，并通過島津公司性能穩(wěn)定的臨床質(zhì)譜LCMS- 8050CL進(jìn)行檢測定量,。

圖2. 全血中免疫抑制劑在線捕集系統(tǒng)

如下圖所示，該系統(tǒng)通過使用在線捕集系統(tǒng)和同位素內(nèi)標(biāo)技術(shù),，可以在1.4min以內(nèi)完成全血當(dāng)中四種免疫抑制劑的準(zhǔn)確定量,。該技術(shù)極大地簡化了全血樣品的前處理過程，提高了工作效率和分析的自動(dòng)化程度,，減少了人為誤差,，確保得到更加準(zhǔn)確的結(jié)果。

圖3. 全血中四種免疫抑制劑質(zhì)譜色譜圖

（紅線：同位素內(nèi)標(biāo),；黑線：未標(biāo)記物）

圖4.四種免疫抑制劑和同位素內(nèi)標(biāo)的離子對信息