中壓制備色譜是一般由泵提供壓力,,壓力在5~20bar,。中低壓色譜柱與常壓柱、HPLC柱有比較大的不同:在使用是是封閉的,,但是可以比較方便的打開與調(diào)節(jié)長度,,這與中低壓色譜常常固體上樣相適應(yīng)的。中低壓制備色譜柱的材質(zhì)主要有塑料柱,、玻璃柱,、不銹鋼柱三種。
中壓制備色譜的主要部件為輸液泵,、進(jìn)樣閥,、檢測器、餾分收集器等,,早期的中壓液相制備色譜,,其輸液泵大流速可達(dá)156mL/min,并配有阻尼器,,以保證液流的穩(wěn)定,;進(jìn)樣器配有0.5-50mL的不同體積的定量管;檢測器有紫外和示差折光檢測器,,流通池體積比較大,,允許大流量流動(dòng)相通過而無需分流;餾分收集器有原盤式和排式兩種,,原盤式的接收管多達(dá)80個(gè),,而后者則更多;色譜柱內(nèi)徑9-105mm,,長度250-1760mm不等,。
對于一般中壓制備色譜,當(dāng)色譜柱直徑較大時(shí),,柱頭往往設(shè)計(jì)成錐形或有類似于傘狀的液流導(dǎo)向結(jié)構(gòu),使得當(dāng)大量樣品進(jìn)入到柱頭上時(shí),,能迅速地分散到整個(gè)柱橫截面上,,及時(shí)被流動(dòng)相沖走,,避免了因樣品的局部過濃而引起柱超負(fù)荷和譜帶加寬。柱子填料則采用比較耐壓的交聯(lián)改性的多糖凝膠(如SepharoseCL,,Superose等),,聚合物微球,復(fù)合材料介質(zhì)或硬質(zhì)SiO2基體的化學(xué)鍵合相等,,粒徑一般在25~40μm(常用的填料尺寸是15-25μm,,25-40μm或40-63μm),可采用濕法或干法裝柱,。
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