色譜法是指用于從混合物中分離組分的科學(xué)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)。它涉及使溶解在“流動相”中的化合物混合物通過“固定相”,，從待混合物中的其他分子中分離和收集待純化的分析物,。該技術(shù)涵蓋了廣泛的多樣化應(yīng)用，包括基礎(chǔ)研究,，藥物發(fā)現(xiàn),，法醫(yī)學(xué)，環(huán)境測試,，運(yùn)動員藥物測試和食品/飲料質(zhì)量控制,。
制備色譜儀操作流程也很重要，下面來講講具體的操作：
(1)分析色譜的目的,，是分析出混合物中一個(或者幾個)純物質(zhì)的含量,。制備色譜的目的，是從混合物中得到純物質(zhì),。
為了加快分離的時間與提高分離的效率,，制備色譜的的進(jìn)樣品量很大，導(dǎo)致制備色譜柱子的分離負(fù)荷的相應(yīng)加大,，也就必須加大色譜柱填料,，增大制備色譜的直徑和長度，使用的相對多的流動相,。
然而,，當(dāng)色譜柱上樣品負(fù)載加大的時候，往往導(dǎo)致柱效急劇下降而得不到純的產(chǎn)品,。制備色譜,，要解決容量與柱子效果之間的矛盾，對重現(xiàn)性也要考慮,。從經(jīng)濟(jì)上來說,。制備色譜要爭取少用填料,，少用溶劑，要盡可能多的得到產(chǎn)品,。
(2)樣品的前處理：
制備色譜柱子由于處理的樣品多,，比分析柱子更容易受污染，所以,，必要的前處理就顯得非常的必要,。萃取、過濾,、結(jié)晶,、固相萃取等簡單的分離方法，如果用得上,，而且還不是很麻煩，就要盡可能多的采用以去掉雜質(zhì),。
(3)固定相的選擇
硅膠,、鍵合固定相(如C18)、離子交換樹脂,、聚酰胺,、氧化鋁、凝膠等都可以作為色譜柱的填料,。有不少文獻(xiàn)報道,，對填料可以進(jìn)行一下處理提高了分離效果，如,，對硅膠進(jìn)行的硝酸銀(或緩沖液)處理,。
(4)裝柱方法的選擇根據(jù)固定相顆粒度和柱子的尺寸，采用不同的裝柱方法,，往往裝填越好分離效果越好,。裝柱效果跟填料的顆粒度關(guān)系很大，顆粒度的減少會導(dǎo)致裝柱的難度,。一般來說,，顆粒直徑小于20-30um的固定相采用濕法裝填。所謂“敲擊-裝填”技術(shù)適用于顆粒直徑大于25um的固定相,。濕法的目的是迫使相對稀松的固定相懸漿以高速裝入色譜柱子,，從而減少空隙的形成。然而,，當(dāng)柱直徑大于20mm,，所加壓力為30-40bar時，高壓懸漿裝填技術(shù)就變得十分復(fù)雜,。為將小顆粒固定相裝入更大得制備型色譜柱,，可采用柱長壓縮技術(shù),。這種方法，先將固定相懸漿(或偶爾是干填充物)裝入柱中加壓,，利用物理方法將其壓緊,。壓緊的方法有兩種：徑向壓縮和軸向壓縮。濕法裝柱需要一定的設(shè)備,，在柱子填完后,，應(yīng)用有柱效的測量，對柱效低的柱子應(yīng)該重填,。
(5)流動相的選擇
除了和分析色譜同樣的考慮外,，在選用流動相時，要考慮色譜分離后面加有旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)等二次分離操作,。一般來說,，不宜采用高毒性溶劑，對多元溶劑要盡可能的少用,。
如果產(chǎn)品中含有大量溶劑,，溶劑的純度也要考慮在其中。
(6)加樣的方法
可以采用以下方法之一進(jìn)樣,。-用注射器進(jìn)樣-用旋轉(zhuǎn)閥進(jìn)樣-通過六通閥進(jìn)樣-通過主泵進(jìn)樣-通過輔泵進(jìn)樣-固體上樣
(7)泵的選用
生產(chǎn)制備色譜泵的廠商很多,。根據(jù)有無脈沖、能承受的Z大壓力,、控制的精度,、售后服務(wù)等來選擇泵。
(8)檢測器的選用
一般的分析池的Z大允許流速僅為5mL/min或者10mL/min,。而專門的制備池的Z大允許流速可為150mL/min,。有時，采用旁路分離管,，將少量流體導(dǎo)入分析池進(jìn)行檢測,，是一個不錯的辦法，但其濃度的誤差會相對較大,。
(9)組分保留時間的估計(jì)
用分析柱子在同等色譜條件下(同樣的固定相和流動相)測定保留時間后,，按照單一組分的線流速(不是體積流速)一定，通過計(jì)算可以知道組分的大致保留時間區(qū)域,。
分析譜圖的峰形狀,，對確定保留時間也有很大的參考價值。
(10)產(chǎn)品的收集
手工餾分收集費(fèi)時費(fèi)力,，自動餾分收集器有很大的方便,。許多實(shí)驗(yàn)室和工廠都采用了餾分收集器。
(11)超載,、邊緣切割,、ZX切割,、放大技術(shù)與非線性效用
在制備色譜中，因?yàn)闆]有必要達(dá)到分析色譜那樣的分離度,，可以在一定范圍內(nèi)大大加大進(jìn)樣的濃度和體積,。在做分離的時候，也有一些分析色譜的時候,，不能用到的技巧,。因?yàn)槠P(guān)系，不在這里敘述,。
(12)柱轉(zhuǎn)換技術(shù)
通過接頭或者閥門,，實(shí)現(xiàn)柱子的簡單延長，或者比較方便地實(shí)現(xiàn)對其中一個(或幾個)組分的精制,。
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