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    選方法是堿裂解法。如果有問題,，或者是大質(zhì)粒 (>15 kb)，則用溫和的方法 SDS 裂解法,。詳細(xì)情況見“分子克隆”,。試劑盒都使用堿裂解法,，所以都有一個(gè)通病，抽提大質(zhì)粒時(shí)效果不好,。

    質(zhì)粒抽提常用的方法是堿裂解法,，它具有得率高，適用面廣,，快速,，純度高等特點(diǎn)。關(guān)于堿裂解法的原理,，復(fù)旦大學(xué)生化與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的有一篇專論,，大家可以去看一下。這是一篇美文,，非常有趣,。文中提到了一個(gè)與能查到的資料不同的觀點(diǎn)，也是非常有啟發(fā)的,。

    當(dāng)然,，堿裂解法相對(duì)質(zhì)粒抽提也有缺陷：容易導(dǎo)致不可逆的變性；不適合大,。堿裂解法是很劇烈的方法,，質(zhì)粒在堿性條件下會(huì)變性，時(shí)間一長(zhǎng),，這種變性就成為不可逆的了 (電泳時(shí)在超螺旋前面一點(diǎn)點(diǎn),，如果有一條帶，就是此變性的質(zhì)粒,。),。所以，要降低不可逆的變性,，就要控制好堿裂解的時(shí)間,。 (似乎可以做這么一個(gè)推理：在堿性條件下，質(zhì)粒的兩條鏈從一點(diǎn)或者幾個(gè)點(diǎn)開始分開,，隨著時(shí)間的延長(zhǎng),，直到分開。理論上講,，分開的兩條鏈要很快地配對(duì)復(fù)性,，成功率不可能是 的，而沒有分開的兩條鏈卻可能 配對(duì)復(fù)性,。) 堿裂解法不適合大,，原因也是因?yàn)樵摲椒ㄌ珓×遥钩菪壤^低,。文獻(xiàn)推薦的抽提大質(zhì)粒的方法是溫和得多的方法,，缺點(diǎn)是得率要低一些?，F(xiàn)在得問題是，大質(zhì)粒的拷貝數(shù)本來就低,，如果抽提方法得率再不高的話,，抽提起來就很費(fèi)力了。如果注意到在堿裂解法中,，超螺旋比例隨著堿裂解時(shí)間的延長(zhǎng)而降低,，隨著粘稠度的增加而減低這個(gè)現(xiàn)象，可以使用堿裂解法來抽提大質(zhì)粒的：增加試劑的使用量,，使加入 NaOH/SDS 液后,，溶液在 1 分鐘內(nèi)就能變得很清澈；立即加入中和試劑,。這個(gè)實(shí)驗(yàn)我們沒有做過,，但 QIAGEN 抽提大質(zhì)粒用的就是堿裂解法。