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iTRAQ蛋白質(zhì)組學(xué)
iTRAQ蛋白質(zhì)組學(xué)
?簡(jiǎn)單介紹：
蛋白質(zhì)組分析(proteomics) 是對(duì)生物蛋白組(proteome) 的分析與檢測(cè),，蛋白組分析先要將混合蛋白質(zhì)分離, 分離的主要方法是蛋白雙向電泳。已被分離的蛋白質(zhì)由質(zhì)譜分析對(duì)其進(jìn)行鑒定。
的4種同位素標(biāo)記試劑由４種相對(duì)分子質(zhì)量分別為114、115,、116和117的報(bào)告基團(tuán)(reporter group)，相對(duì)分子質(zhì)量分別為31,、30,、29 和28 的質(zhì)量平衡基團(tuán)(balance group)以及一個(gè)相同的肽反應(yīng)標(biāo)記試劑基團(tuán)(peptide reactive group)組成。不同的報(bào)告基團(tuán)分別與相應(yīng)的平衡基團(tuán)相配后,，相對(duì)分子質(zhì)量均為145,，即等量異位標(biāo)簽(isobaric tag)。
將蛋白質(zhì)裂解為肽段,，然后用iTRAQ試劑進(jìn)行差異標(biāo)記,。由于iTRAQ試劑是等量的，即不同同位素在標(biāo)記同一多肽后在*級(jí)質(zhì)譜檢測(cè),，分子量相同,，用串聯(lián)質(zhì)譜方法對(duì)在*級(jí)質(zhì)譜檢測(cè)到前體離子(precursor ion)進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)解離，產(chǎn)物離子通過第二級(jí)質(zhì)譜進(jìn)行分析,。在二級(jí)質(zhì)譜分析過程中,，報(bào)告基團(tuán)、質(zhì)量平衡基團(tuán)和多肽反應(yīng)基團(tuán)之間的鍵斷裂,，質(zhì)量平衡基團(tuán)丟失,，產(chǎn)生低質(zhì)荷比(m/z)的報(bào)告離子。由于二級(jí)質(zhì)譜可分析相對(duì)分子質(zhì)量相差1的報(bào)告基團(tuán),，不同報(bào)告基團(tuán)離子強(qiáng)度的差異就代表了它所標(biāo)記的多肽的相對(duì)豐度,。同時(shí)，多肽內(nèi)的酰胺鍵斷裂,，形成一系列b 離子和y 離子,，得到離子片段的質(zhì)量數(shù)，通過數(shù)據(jù)庫(kù)查詢和比較,，可以鑒定出相應(yīng)的蛋白質(zhì)前體.
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