一,、 人外周血單個核細胞（PBMC）的分離
1. 3ml抗凝血加入3ml 1×PBS進行稀釋,。
2. 在15ml離心管內(nèi)加入3ml淋巴細胞分離液,，再在液面上方平鋪3ml稀釋過的抗凝血，常溫下,，水平離心機600g,，離心30min,。
3. 吸取中間白膜層細胞，加入15ml離心管中,，再加入10ml 1×PBS混勻,，常溫下，1000rpm,，離心10min,，棄上清，每管加入2ml MACS緩沖液重懸細胞并計數(shù),，調(diào)整細胞數(shù)量,，每個樣本不超過107個細胞。
4. 2000rpm,，離心3min,，棄上清。
二,、 磁珠分選
1. 每管加入40ul MACS緩沖液重懸細胞,，再加入10ul CD4+T Cell Biotin-Antibody Cocktail, human，混勻,，4℃孵育5min,。
2. 每管加入30ul MACS緩沖液，再加入20ul CD4+T Cell MicroBead Cocktail,human,，混勻,，4℃孵育10min。
3. 將分選柱置于磁力架上,，加入3ml MACS緩沖液潤洗柱子,，待液體不再流出，更換新的離心管,。
4. 將細胞懸液加入分選柱,，待液體不再流出，加入3ml MACS緩沖液洗柱子,，液體收集完畢,，將離心管撤離后，再將分選柱撤下,。
5. 將收集到的細胞懸液進行離心,，1500rpm，5min,，去上清,。
三、流式鑒定
