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主營產(chǎn)品： 高血脂癥動物模型,心血管疾病動物模型,缺血性心臟病動物模型 |
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2020-12-24 閱讀(7567)
MTT增殖曲線,，基本上就是基礎(chǔ)的功能實驗了，養(yǎng)過細(xì)胞的你應(yīng)該都會做。
但是,，要怎么樣才能省時省力呢？你也知道,，如果用MTT的話,，加入10ul的MTT后要等四個小時，在活細(xì)胞的線粒體中形成甲囋,，然后在把培養(yǎng)基吸掉,，再加上DMSO溶解，進行檢測,。
這個方法是常用的MTT方法,，但是會有三個問題，*個是有的甲囋不容易溶解,。
還有一個問題就是,，由于要讓DMSO充分溶解甲囋，所以會要混勻,，就會產(chǎn)生泡沫,，影響酶標(biāo)儀讀值：
第三個問題，就是在吸去培養(yǎng)基的時候,，容易把甲囋也吸走,，導(dǎo)致終讀值不準(zhǔn)。
當(dāng)然也不是沒有辦法的,，這篇文獻中提到在DMSO中加入8到800mM的氨的堿性DMSO能更快更好地溶解甲囋：
當(dāng)然,，這個也是有人親測可用的。不過,，我們還是來談?wù)劻硪环N溶劑哈,，就是傳說中的三聯(lián)液，這個其實是1983年Mosmann大神*次發(fā)明MTT法時所采用的溶解液：
初的版本是酸化異丙醇,，也就是加入了0.04N的鹽酸的異丙醇,。但是后來又衍生成為了：SDS10g，異丁醇5ml,，0.1ml的10M HCl,，用雙蒸水溶解配成100ml溶液，這就是三聯(lián)液,。
三聯(lián)液的優(yōu)點在于不用吸去培養(yǎng)基,，當(dāng)然，缺點就是要溶解很久,。不過加完三聯(lián)液后可以過夜,，第二天再測,。
還有一種檢測方法也很常見，就是CCK8,，和MTT的區(qū)別就在于……貴,。比如MTT要5分錢，CCK8差不多就5毛……還有一點就是,，CCK8會形成水溶性的橙色甲囋,，MTT形成的是紫色的有機溶劑溶解的甲囋。
所以CCK8加入后,，就直接等4小時左右，讓橙色甲囋溶解到培養(yǎng)基就能檢測了,。而MTT,，就需要用DMSO再溶解出來……
